Contaminantes microbiológicos
Atendendo às suas necessidades de testes de microbiologia
Durante a produção de biofármacos, microrganismos contaminantes podem entrar no processo em várias etapas. Uma vez introduzidos, bactérias e fungos podem se replicar exponencialmente, comprometendo gravemente o produto final. Além disso, o uso de linhagens de células de mamíferos para a produção introduz o potencial de contaminação por micoplasma e micobactéria.
A presença de microrganismos em vacinas e outros biofármacos pode, com o tempo, afetar o produto e representar um grande risco à saúde do paciente. Como tal, os órgãos reguladores, incluindo a Food and Drug Administration (FDA) e a European Medicines Agency (EMA), têm testes rigorosos para garantir que não ocorreu contaminação. Isso é determinado por meio de testes microbiológicos de amostras representativas de um lote para identificar a presença de qualquer microrganismo viável no material. A comprovação de que seu produto está isento de contaminantes microbianos faz parte da documentação necessária para a liberação de biofármacos.
A Sartorius fornece um pacote abrangente de ensaios de biossegurança microbiológicos para cobrir seus requisitos de teste de contaminação microbiológica, incluindo:
- Esterilidade por inoculação direta
- Enumeração microbiana de produtos não estéreis por método de placa
- Ensaio de cultura de micoplasma
- Micoplasma por PCR
- Detecção de Mycobacterium spp.
Detecção de endotoxina usando o Pyros® Kinetix® Flex
Nossos especialistas elaboram um plano de teste de microbiologia em torno de seu desenvolvimento exclusivo de medicamentos ou necessidades de produtos comerciais
Métodos de teste microbiano prontos para uso e com qualidade garantida, com qualificação ou validação da matriz de seu produto no ensaio, reduzem os prazos de teste
Os métodos baseados em PCR aceleram a fabricação; o teste compendial é realizado em paralelo para atender às suas necessidades de desenvolvimento de medicamentos ou liberação de lote comercial
Crie sua estratégia de teste de microbiologia
Amostrado de | Teste de esterilidade | Teste de Enumeração Microbiana | Teste de Mycoplasma (Compendial) | Teste de micoplasma por PCR | Teste de Mycobacterium | Teste de endotoxina |
|---|---|---|---|---|---|---|
Banco de células de pesquisa | X | - | - | X | X* | - |
Master Cell Bank | X | - | X | - | X* | - |
Banco de células de trabalho | X | - | X | - | X* | - |
Fim do Banco de Células de Produção | X | - | X | - | X* | - |
Estoque de sementes de vírus mestre | X | - | X | (X) | X* | - |
Estoque de sementes de vírus em funcionamento | X | - | X | (X) | X* | - |
Colheita a granel não purificada | - | X | X | (X) | X* | - |
| Substância droga | X | - | - | - | - | - |
Produto medicamentoso | X | - | - | - | - | X |
X * Teste de Mycobacterium exigido apenas para linhas de células humanas ou primatas e produtos derivados de linhagens de células humanas ou primatas.
(X) Other risk-based approaches to mycoplasma testing may be employed when there is an inability to neutralize the sample virus. This should be discussed with your regulator.
Teste de esterilidade
O teste de esterilidade deve ser realizado e demonstrado durante todo o processo de produção de uma vacina biológica ou viral.
A Sartorius oferece testes de esterilidade por inoculação direta e por filtração por membrana de acordo com os regulamentos GMP e em conformidade com os padrões da Farmacopéia Européia (EP), Farmacopéia Japonesa (JP) e Farmacopéia dos Estados Unidos (USP).
Antes do teste, a matriz da amostra deve ser qualificada no ensaio para examinar quaisquer efeitos inibitórios; isto é conseguido enriquecendo o material de teste com organismos de teste representativos em baixas concentrações e observando um crescimento aceitável.
Os seguintes organismos são adequados como organismos modelo:
Bactéria aeróbia
- Staphylococcus aureus
- Bacillus subtilis
- Pseudomonas aeruginosa
Bactéria anaeróbia
- Clostridium sporogenes
Fungi
- Candida albicans
- Aspergillus brasiliensis
No teste de esterilidade direta, a amostra é inoculada em dois meios de crescimento diferentes: tioglicolato fluido e digestão de caseína de soja. Para o teste de filtração por membrana, a amostra é filtrada através de filtros de 0,45 µM que são então inoculados em caldo de soja Trypticase (TSB) e meio de tioglicolato fluido. Em ambos os métodos, o teste é incubado por 14 dias. A Sartorius pode relatar os resultados do ensaio com um certificado de análise dentro de 5 dias das observações finais.
Deve-se observar que esses testes de esterilidade não se aplicam a artigos que não se destinam a ser estéreis; um teste de bioburden deve ser usado neste caso.
A Sartorius pode aconselhar sobre os testes adequados para o seu material, bem como o número de amostras e volumes.s well as sample number and volumes.
Enumeração microbiana
O objetivo de um teste de bioburden é enumerar bactérias mesófilas e fungos que podem crescer em condições aeróbias. O teste é projetado principalmente para determinar se uma substância ou preparação cumpre ou não uma especificação estabelecida para a qualidade microbiológica. É semelhante ao teste de esterilidade, mas realizado onde a amostra não precisa ser estéril, pois será submetida a processamento adicional. Portanto, este teste é geralmente usado para matérias-primas e amostras em processo, como colheitas a granel, onde o cliente definiu limites aceitáveis de biocarga para seus processos internos. (O teste de esterilidade também pode ser realizado em amostras de colheita a granel que se espera que sejam estéreis. Fica a critério do desenvolvedor se usar uma carga biológica ou teste de esterilidade.)
Dois métodos estão disponíveis para o teste de bioburden - filtração por placa ou membrana. Ambos são aceitáveis para os reguladores e podem ser usados a critério do desenvolvedor. O método da placa é mais típico para processar um grande volume de amostra. Se certos efeitos inibitórios forem observados, como antibióticos, então a filtração por membrana pode ser usada.
No método de contagem em placa, o material de teste é diluído 10 vezes em água tamponada antes de os volumes predefinidos serem espalhados em 2 placas de TSA e 2 placas de SDA. Estes são incubados e a média de UFC / mL é registrada.
A Sartorius pode aconselhar sobre os testes e métodos de teste adequados para o seu material.
Teste de Mycoplasma
A detecção e remoção de micoplasma é crítica para produtos biológicos produzidos para estudos clínicos e produtos licenciados para uso humano. O teste é complicado, pois a família de micróbios tem muitos requisitos diferentes e muitas vezes exigentes para o crescimento. A Sartorius oferece serviços de teste de micoplasma que estão em conformidade com os padrões cGMP e com as diretrizes atuais do Conselho Internacional para Harmonização de Requisitos Técnicos para Produtos Farmacêuticos para Uso Humano (ICH), Farmacopeia Europeia (EP) e Farmacopéia dos Estados Unidos (USP).
Existem dois componentes tradicionais para o teste de micoplasma descritos no EP - o método de ágar e caldo e o método de cultura de células indicadoras in vitro. A matriz da amostra a ser testada deve ser qualificada no ensaio antes do teste; A qualificação envolve adubar o material de teste com organismos de teste em baixas concentrações e demonstrar a detecção.
Os seguintes organismos são adequados como organismos de teste:
- A. laidlawii
- M. gallisepticum
- M. fermentans
- M. hyorhinis
- M. orale
- M. pneumoniae
Ágar e caldo
Para o método de ágar e caldo, a amostra é inoculada em diferentes tipos de meios líquidos e sólidos, que são posteriormente incubados em diferentes condições ambientais (aeróbia e anaeróbia). Durante o período de incubação, amostras do caldo inoculado também são retiradas e inoculadas no meio de cultura de ágar. A detecção de colônias indica um teste positivo; todo o teste dura 28 dias.
Cultura de células indicadoras in vitro
O método de cultura de células indicadoras in vitro requer que a amostra seja inoculada em um substrato de célula adequado (células de camundongo 3T3 ou Vero), cultivada e corada com um corante fluorescente que se liga ao DNA. As culturas são observadas por microscopia de luz para identificar pontos fluorescentes, ou grânulos, ao redor do núcleo das células indicadoras, o que indica a presença de micoplasmas. A Sartorius pode relatar os resultados do ensaio com um certificado de análise dentro de 5 dias das observações finais.
Reação em cadeia da polimerase de micoplasma rápida (PCR)
Além dos métodos de ágar e caldo, a Farmacopeia Europeia agora aceita um teste de micoplasma baseado em PCR, após validação apropriada. O EP se junta à US Food and Drug Administration (FDA), que aceitou o uso de detecção de micoplasma baseada em PCR para liberação de um produto biofarmacêutico desde 2012. Com esse teste, os fabricantes podem substituir os métodos existentes, que podem durar até 28 dias, com uma técnica rápida. O teste de PCR de Mycoplasma pode ser realizado na Sartorius e o resultado relatado em 48 horas a partir do recebimento da amostra.
Teste de Mycobacterium
Este ensaio é realizado ao testar linhas de células humanas ou primatas, que são suscetíveis a Mycobacterium spp. A amostra é inoculada em dois tipos de meio de ágar seletivo e um tipo de meio de caldo. Os meios são cultivados por 56 dias de 36 a 38oC e são observados quanto à presença de micobactérias. Para qualificar o teste, um controle incrementado é incluído, onde o material de teste é desafiado com o controle positivo Mycobacterium tuberculosis para testar a inibição do crescimento de micobactérias. Este método está em conformidade com a secção 2.6.2 da Farmacopeia Europeia.
Para qualificar o teste, um controle incrementado é incluído, onde o material de teste é desafiado com o controle positivo Mycobacterium tuberculosis para testar a inibição do crescimento de micobactérias.
Este método está em conformidade com a secção 2.6.2 da Farmacopeia Europeia.
Teste de endotoxina
O teste de endotoxina é normalmente realizado apenas no medicamento final. As endotoxinas fazem parte da membrana externa da parede celular de bactérias gram-negativas, que podem potencialmente contaminar culturas de células durante a produção de biofármacos ou contaminar produtos terapêuticos finais.
O teste turbidimétrico é realizado adicionando lisado de amebócito limulus (LAL) - um extrato aquoso de células sanguíneas (amebócitos) do caranguejo ferradura do Atlântico - à amostra líquida ou diluição de endotoxina padrão. Em seguida, a turbidez da mistura de reação é medida. Em concentrações mais altas de endotoxina, a enzima de coagulação é ativada mais rapidamente, de modo que a amostra se torna mais turva. Como um ensaio cinético, o tempo para cada amostra atingir uma densidade óptica particular (DO) é a medida crítica.
Os softwares Pyros® Kinetix® Flex e Pyros® eXpress foram validados para realizar análises cinéticas turbidimétricas. Os tempos de início da amostra são comparados a uma curva padrão para quantificar a concentração de endotoxina da amostra.
O ensaio de endotoxina cinética realizado na Sartorius segue USP <85> Endotoxinas Bacterianas harmonizadas e EP 2.6.14 Endotoxinas Bacterianas.
De acordo com os regulamentos, a qualificação da matriz de amostra para inibição e aprimoramento é necessária antes de testar uma nova matriz de amostra.
