Caracterização de linha celular
Como desenvolvedor de medicamentos, o primeiro desafio regulatório de fabricação enfrentado é a geração de um banco de células mestre e de trabalho. A produção deve ser realizada de acordo com as Boas Práticas de Fabricação e requer conhecimento especializado tanto para a fabricação em si quanto para os extensos testes de biossegurança e caracterização necessários para liberar os bancos.
A Sartorius oferece uma ampla gama de serviços para caracterizar seus bancos de células de mamíferos de acordo com as diretrizes regulatórias da ICH (ICH Tópico Q 5 D Qualidade de Produtos Biotecnológicos: Derivação e Caracterização de Substratos Celulares Usados para Produção de Produtos Biotecnológicos / Biológicos). Nossos serviços estão em conformidade com os padrões globais de farmacopéia e são realizados em instalações credenciadas pelo FDA dos EUA, bem como pela EMA e MHRA.
Planos de controle de qualidade prontos para uso suportam testes e liberação de bancos de células para uso em programas de manufatura:
- Banco de células de pesquisa (RCB)
- Banco de células mestre (MCB)
- Banco de células de trabalho (WCB)
- Banco de células de fim de produção (EoPCB)
A Sartorius tem vasta experiência na caracterização de bancos de células usados na produção de medicamentos biológicos para terapias baseadas em proteínas e virais. Os planos de teste de QC da Sartorius atendem aos requisitos para liberação de banco de células de mamíferos e são projetados para atender aos regulamentos ICH Q5A com ensaios validados para os padrões GMP. Os esquemas de teste prontos para uso podem ser adicionados às Estratégias de Risco de Desenvolvimento de Medicamentos existentes ou personalizados para as necessidades de programas específicos.
Pacotes de teste e caracterização de biossegurança de banco de células
Requisitos de teste de banco de células
Com um perfil de segurança estabelecido ao longo de 20 anos, as células CHO são de longe as linhas de células de produção mais utilizadas na indústria farmacêutica. A Sartorius realizou testes de biossegurança e caracterização em mais de 200 bancos de células CHO. Nossos cientistas têm vasta experiência para aconselhar sobre a estratégia de teste mais apropriada e econômica para atender aos requisitos regulamentares. Essa recomendação leva em consideração tanto o histórico da linha celular quanto as matérias-primas utilizadas na fabricação do banco. Abaixo está um plano de teste de QC padrão para caracterização de linha de células CHO. Embora este plano possa ser modificado para células de origem humana e símia, os princípios básicos se aplicam.
Test | MCB | WCB | EoPC |
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Identity |
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Mycoplasma |
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Sterility |
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In vitro assays |
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In vivo assays |
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Antibody tests |
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Retrovirus infectivity |
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Reverse transcriptase |
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Electron microscopy |
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Species specific tests |
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Table 1: Overview of GMP, GLP Testing Requirement
Teste de banco de células de pesquisa
O processo de banco de células começa com a introdução de um Banco de Células de Pesquisa (RCB) na fabricação de um Banco de Células Mestre (MCB).
Para que isso ocorra, o RCB deve ser certificado, no mínimo, como estéril, livre de micoplasma e com identidade garantida. Além disso, pode ser solicitado pelo fabricante que um teste in vitro de amplo espectro baseado em células para potenciais contaminantes virais seja realizado.
Para agilizar o lançamento do RCB, as opções incluem teste rápido por reação em cadeia da polimerase (PCR), estratégias de leitura provisória in vitro e teste de identidade por código de barras de DNA.
Teste de banco de células mestre
Nossa equipe tem ampla experiência na caracterização de bancos de células e fornece um conjunto abrangente de ensaios para testes de MCB. Podemos consultar sobre os requisitos de teste específicos de uma linha de células ou bancos de células.
do banco de células mestre abrange uma gama de atividades, incluindo teste de identidade e avaliação da estabilidade genética. Além disso, vários ensaios devem ser realizados para detectar a presença de contaminantes potenciais.
Uma variedade de testes é usada na detecção de agentes contaminantes, incluindo aqueles para detectar microrganismos (esterilidade, micoplasma e micobactéria), bem como ensaios in vivo, in vitro, ensaios de infectividade de retrovírus e microscopia eletrônica de transmissão. Eles podem ser usados para detectar vírus adventícios e endógenos.
Uma série de testes de vírus específicos da espécie também é necessária para as diferentes linhas de células de produção (bovina, suína, inseto, camundongo, hamster, humano ou primata). Para avaliar e determinar a estabilidade genética do banco de células, várias técnicas diferentes podem ser aplicadas. Estes podem incluir Southern blotting, sequenciação de mRNA ou número de cópias do transgene. A identidade é determinada pelo código de barras do DNA.
A metodologia de teste usada para caracterizar bancos de células mestras originadas de diferentes espécies inclui:
- Teste de esterilidade
- Teste de Mycoplasma
- ensaios in vivo
- ensaios in vitro
- Ensaios de retrovírus
- Ensaios de bovinos e suínos
- Microscópio eletrônico
- Ensaios específicos para espécies
Os ensaios de estabilidade genética fornecidos pela Sartorius incluem o seguinte:
- Sequenciamento de ácido nucléico
- Southern Blot
- Teste de Identidade
- Número da cópia do gene
Contact Sartorius biosafety scientistspara discutir os requisitos de caracterização do MCB.
Teste de banco de células de trabalho
Os bancos de células de trabalho (WCB) são preparados a partir do MCB. Os requisitos de teste de biossegurança do WCB dependem do nível de teste que foi conduzido no MCB.
Onde a caracterização extensiva já foi concluída no MCB, testes mínimos são necessários no WCB. Dependendo da autoridade reguladora, isso normalmente se limita à avaliação da identidade, estabilidade e contaminação por micróbios. O teste de vírus só é recomendado quando ocorre um risco reconhecido.
Para caracterizar a estabilidade genética, o transgene é avaliado usando técnicas como Southern blotting, sequenciamento de mRNA e / ou número de cópias do transgene. A identidade pode ser medida usando códigos de barras de DNA. A presença de micróbios é determinada usando ensaios de esterilidade, micoplasma e micobactéria.
As metodologias de teste usadas para caracterizar bancos de células de trabalho originárias de diferentes espécies incluem:
- Teste de esterilidade
- Teste de Mycoplasma
- ensaios in vitro
Os ensaios de estabilidade genética podem ser solicitados usando estes métodos:
- Sequenciamento de ácido nucléico
- Southern Blot
- Teste de Identidade
- Número da cópia do gene
Fim da produção de bancos de células
Um Banco de Células de Fim de Produção (EoPCB) é algumas vezes referido como Banco de Células de Pós-Produção (PPCB) ou como células no limite do cultivo in vitro. Essas células são testadas para validar o sistema de produção. Isso garante que as células sejam estáveis e que não haja problemas de contaminação no sistema.
O momento da amostragem para um EoPCB varia entre os produtos e é realizado caso a caso.
Para linhas de células usadas na fabricação de terapias baseadas em proteínas, os requisitos de teste são duplos; incluem testes de estabilidade e testes de contaminação (Biossegurança). Os esquemas de teste para linhas de células usadas em vacinas virais ou vetores virais podem não exigir as mesmas avaliações de estabilidade genética, dependendo do processo de geração de MCB.
Os requisitos para o EoPBC são muito semelhantes aos do Master Cell Bank. O EoPCB requer testes de estabilidade genética e comparação direta com o MCB. Os testes usados incluem análise genética do transgene usando técnicas como Southern blotting, sequenciamento de mRNA ou número de cópias do transgene. Vários métodos diferentes são usados para testar possíveis contaminantes, incluindo micróbios (esterilidade e micoplasma), vírus adventícios (in vitro e in vivo, microscopia eletrônica de transmissão) e testes de vírus específicos, conforme determinado pelo processo.
A metodologia de teste usada para caracterizar EoPBC originários de diferentes espécies inclui:
- Teste de esterilidade
- Teste de Mycoplasma
- teste in vivo
- teste in vitro
- Teste de Retrovírus
- Ensaios de bovinos e suínos
- Microscópio eletrônico
- Ensaios Específicos para Espécies
Os ensaios de estabilidade genética fornecidos pela Sartorius incluem o seguinte:
- Sequenciamento de ácido nucléico
- Southern Blot
- Teste de Identidade
- Número da cópia do gene
