Cromatografia de interação hidrofóbica (HIC)
O bioprocessamento de hoje requer mais precisão e operações mais eficientes. A cromatografia de interação hidrofóbica (HIC) separa as moléculas com base nas diferenças em sua hidrofobicidade de superfície. Esta tecnologia é amplamente utilizada na purificação cromatográfica, especialmente como uma etapa de purificação mais precisa de outros métodos, como troca iônica (IEX) ou afinidade. HIC normalmente requer alta concentração de sal para ligação eficiente da proteína alvo. Portanto, é idealmente usado após as etapas cromatográficas em que a eluição é realizada com altas concentrações de sal, isto é, cromatografia de troca iônica.
A Sartorius tem uma variedade de modalidades de HIC (resinas, membranas e monólitos) para atender à sua aplicação.
Método poderoso para remover agregados
Ideal após a limpeza inicial da amostra e cromatografia IEX
Ideal para as etapas finais de polimento ou purificação intermediária de moléculas grandes
Encontre a solução certa para o seu processo de cromatografia de interação hidrofóbica
O HIC é usado principalmente para remoção de agregados devido ao seu desempenho superior nessa função.
As resinas exibem boas capacidades de ligação para proteínas de pequeno e médio porte, enquanto as resinas de modo misto geralmente combinam mecanismos HIC e IEX.
As membranas têm uma capacidade de ligação mais alta a vírus, partículas semelhantes a vírus e outros grandes complexos em comparação com resinas e também oferecem a vantagem de taxas de fluxo mais altas, resultando em menor tempo de processo e maior produtividade.
Monólitos de HIC são essenciais na separação de isoformas de DNA de plasmídeo.
Membranes | Monoliths | |
|---|---|---|
Application | Capture of large biomolecules, polishing of all biomolecules | Capture and polishing of large biomolecules |
Implementation | Intrabatch multi-use, single-use between batches | Intrabatch multi-use, single-use between batches |
Ease of use | Ready-to-use | Ready-to-use |
Scalability | Capsules and cassettes for linear scale-up | Wide range of device sizes |
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Membranas Sartobind® Membranes em HIC
Sartobind® Phenyl – Fácil Remoção de Agregados
Sartobind® Phenyl é uma membrana de interação hidrofóbica com baixa substituição de ligante. Isso permite condições de eluição suaves para a purificação de todas as biomoléculas.
As membranas Sartobind® Phenyl podem ser consideradas como um substituto para colunas para operações de polimento (fluxo direto) e uma série de aplicações de ligação e eluição, pois trabalham com taxas de fluxo muito mais altas, complexidade reduzida e sem efeitos de exclusão de tamanho ao purificar grandes biomoléculas.
A capacidade de ligação dinâmica típica (DBC) em 10% de avanço é:• 9-13 mg/mL mAb
• 10 mg/mL BSA
• 23 mg/mL Lysozyme
Monólitos para HIC
A escolha para cromatografia de interação hidrofóbica (HIC)
A cromatografia de interação hidrofóbica (HIC) é uma obrigação para separações de ácido nucléico. Quando combinado com as vantagens da cromatografia monolítica, o HIC atende a essa necessidade, ao mesmo tempo que fornece uma excelente solução para a purificação de grandes biomoléculas, incluindo vírus adenoassociados (AAV).
CIMmultus® OH | ||
Tamanhos de canal | 1.3, 2, 6 µm | 2, 6 µm |
Volume da coluna | 1 mL – 8 L | 1 mL – 8 L |
Faixa de trabalho, pH | 2 – 10 | 2 – 10 |
| Funcionalidade | Fraco hidrofóbico | Hidrofóbico forte |
| Aplicação típica | Vírus, (ou seja, AAV) e VLPs | Ácidos nucleicos (pDNA, mRNA) |
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CIMmultus® OH – Hydrophobic Interaction Chromatography
Ligante não carregado (neutro)
Faixa de trabalho, pH 2-10
Retém solutos muito grandes (partículas de vírus, VLP, vesículas) na presença de sais precipitantes ou polietilenoglicol
Elui grandes solutos com alta resolução em ordem crescente de tamanho
Eluição com sal descendente ou polietilenoglicol
Sanitizável com NaOH 1 M
CIMmultus® C4-HLD - Cromatografia de interação hidrofóbica
Ligante fortemente hidrofóbico (sem carga)
Faixa de trabalho, pH 2-10
Altamente eficaz para remover proteínas de ácidos nucleicos (pDNA, RNA)
