Caracterização Biofísica (Caracterização Estrutural e Confirmação)

A terapêutica baseada em proteínas é produzida em células vivas, resultando em um grau inerente de heterogeneidade estrutural. A caracterização da heterogeneidade estrutural inerente é um requisito essencial para o desenvolvimento de um anticorpo monoclonal terapêutico. Modificações pós-tradução podem afetar a estabilidade in vivo, perda de atividade biológica e causar efeitos imunológicos indesejados.

A Sartorius fornece o suporte e o conselho necessários para mitigar esses riscos, garantindo que a estrutura da proteína e as análises físico-químicas sejam realizadas em estágios apropriados do desenvolvimento de proteínas terapêuticas. Oferecemos uma gama abrangente de métodos para caracterizar e confirmar a estrutura da proteína, perfil de carboidratos e modificações pós-tradução usando técnicas de ponta para garantir que as diretrizes científicas ICH Q6B sejam atendidas, resultando em um processo de desenvolvimento eficiente e simplificado.

Perfil personalizado de glicosilação de proteínas

Oferecemos três métodos para avaliar glicoformas em proteínas intactas em qualquer estágio de seu programa

Caracterização holística

Oferecemos caracterização estrutural e físico-química, combinada com análises biológicas complexas, para caracterizar completamente sua proteína

Ensaios prontos para usar

Para moléculas padrão como IgGs, pré-qualificamos nossos ensaios para implantação rápida

Capacidade de liberação de lote

Podemos fazer parceria com você desde a caracterização do clone de fase inicial até o lançamento de lote totalmente compatível com cGMP, com soluções personalizadas em cada estágio

Requisitos ICH Q6BNossas Soluções
Estrutura de carboidratosLabchip com nosso desenvolvimento de linha celular Cellca (link) para CLD de fase inicial (pool to clone, inline)Lançado N-glicano por UHPLC para CLD de fase tardia (seleção final do clone)Lançado N-glicano por LC / MS para caracterização aprofundada
Sequência de aminoácidosMapeamento de peptídeos, digestão de enzima única para> 95% de coberturaMapeamento de peptídeos, digestão de múltiplas enzimas para cobertura de 100%Massa intacta para garantia preliminar de identidade de proteína
Composição de aminoácidosAnálise de aminoácidos
Sequência de aminoácidos terminalMapeamento de peptídeo
Mapa de peptídeos e modificações pós-traduçãoMapeamento de peptídeoMassa intacta
Grupo (s) sulfidrila e pontes dissulfetoMapeamento de peptídeo não reduzido


Análise de N-Glycan liberada por LC / MS

A Sartorius oferece um ensaio de N-glicano lançado para o perfil detalhado da glicosilação de IgG. Os glicanos são removidos enzimaticamente do anticorpo e então rotulados antes de uma separação por cromatografia líquida de alta resolução (LC) ser realizada (ver cromatograma abaixo).

A detecção de fluorescência juntamente com a espectrometria de massa (MS) ESI online permite a atribuição confiável e a quantificação precisa das diferentes estruturas de glicano. Estes podem então ser agrupados de acordo com sua classificação estrutural (por exemplo, complexo, oligomanose) e composição de monossacarídeo, como perfis de fucose, galactose e ácido siálico.

O cromatograma mostra as principais glicoformas identificadas, em relação ao pico de GOF mais abundante definido como 100%.

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Vias Múltiplas Digest

Comumente, a tripsina é usada como uma protease para mapeamento de peptídeos devido à sua alta especificidade para resíduos de lisina e arginina. No entanto, pode haver uma necessidade de usar outras enzimas nos casos em que a tripsina sozinha não fornece cobertura de sequência de 100% ou a proteína de interesse é resistente à atividade da tripsina.


O mapeamento de peptídeos pode ser realizado usando uma variedade de enzimas proteolíticas, com especificidade ortogonal para tripsina, para obter diferentes vias de fragmentação de peptídeos e obter confiança adicional para verificação de sequência por meio do uso de peptídeos sobrepostos.

Modificações pós-traducionais

O mapeamento de peptídeos constitui uma parte importante da análise da estrutura da proteína, pois também permite a caracterização analítica de uma variedade de modificações pós-tradução (PTMs), incluindo: desamidação, oxidação, ácido piroglutâmico N-terminal, corte de lisina C-terminal e glicosilação.

O mapeamento de peptídeos também pode ser realizado sem redução das ligações dissulfeto para determinar as posições das pontes dissulfeto e / ou tióis livres (grupos sulfidrila).

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