Cromatografia de afinidade

Introdução

O sorvente de cromatografia composta Heparin HyperD ™ M é um sorvente preparativo por afinidade projetado para a purificação de moléculas biológicas que se ligam à heparina, como fatores de coagulação, fatores de crescimento, lipoproteínas ... O sorvente fornece alta capacidade de ligação a altas taxas de fluxo. A exclusiva estrutura composta da Heparin HyperD M foi escolhida para fornecer capacidade dinâmica superior em altas velocidades lineares.

O sorvente "gel em concha" da Heparina HyperD é composto por um cordão mineral rígido poroso contendo poros preenchidos com hidrogel ligados à heparina. A heparina HyperD M tem um tamanho médio de partícula de 80 µm e é usada para purificação em escala preparativa de ATIII. O sorvente pode ser embalado em tamanhos de coluna de mL a mais de cem litros e operado em altas taxas de fluxo com baixa contrapressão. O vazamento de heparina é minimizado devido à ligação química estável da molécula de heparina ao sorvente.

A Heparin HyperD M está disponível em embalagens prontas para uso, suspensas em cloreto de sódio 1 M com etanol a 20% como bacteriostático. Maiores quantidades a granel também estão disponíveis mediante solicitação.

Características e benefícios

• Alta capacidade de ligação dinâmica com alta vazão linear
• Método de referência para purificação em larga escala de Antitrombina III (AT III)
• Purificação de várias proteínas da escala de laboratório à produção

Aplicações de adsorventes de afinidade Heparin HyperD ™ M

A heparina é um mucopolissacarídeo conhecido por suas ações anticoagulantes e esclarecedoras e é composta por quantidades equimolares de glucosamina e ácido glucurônico, alternativamente ligadas por ligações alfa-1,4 glicosicas.

Um certo número de seus grupos hidroxila é esterificado com ácido sulfúrico, especialmente aqueles em C-6 de glucosamina. Outros grupos também são sulfatados, incluindo C-3 de glucosamina e C-2 de ácido glucurônico. A principal característica da heparina é que ela contém um grande número de grupos amino combinados com grupos sulfato, sendo este último bastante lábil em meio ácido.

A molécula contém pequenas quantidades de outro açúcar, como galactose e xilose, e aminoácidos. Como resultado de sua composição e seu papel bioquímico, a heparina tem a propriedade de combinar com várias proteínas, enzimas e, em geral, com compostos orgânicos policatiônicos. Também é combinado com alcalóides, antibióticos, manchas e hormônios.

Principais aplicações

• Método de referência para purificação em larga escala da antitrombina III (ATIII)
• Outros fatores de coagulação, como Fator IX, Fator VII, Fator XI, Fator XII e XIIa
• Purificação de lipases de lipoproteínas
• Lipoproteínas (LDL, VLDL, apoproteína VLDL, HDL)
• Hormônios do crescimento
• Fatores de crescimento: FGF (fator de crescimento de fibroblastos), ECGF
• Enzimas relacionadas a DNA e RNA
• Purificação de várias outras enzimas (colagenase, α-L-iduronidase, hialuronidase e lisozima), fibronectina, fragmentos de fibronectina e receptores hormonais

Principais propriedades do adsorvente de afinidade Heparina HyperD M

* Capacidade determinada utilizando hu ATIII a 72,5 UI/ml em Tris-HCl 20 mM, NaCl 0,3 M, pH 7,4. Eluição com Tris-HCl 20 mM, NaCl 2 M, pH 7,4 a 600 cm/h, altura do leito de 10 cm

Estabilidade mecânica e química

A estabilidade do pH é a mesma da heparina solúvel livre: entre 3 e 13. Os agentes dissociantes e detergentes geralmente não têm efeito sobre o sorvente de heparina. A heparina HyperD M pode ser limpa com hidróxido de sódio em concentrações de 0,01 a 0,1 M.

A matriz HyperD não compressível pode suportar taxas de fluxo muito altas sem risco de colapso do leito. Como resultado, o Heparin HyperD M economiza tempo do usuário e preserva a integridade biológica das proteínas purificadas. As propriedades mecânicas do sorvente Heparin HyperD M permanecem constantes em uma ampla faixa de velocidades. A queda de pressão mínima, mesmo em alta velocidade linear, garante escala direta e previsível até qualquer volume.

Capacidade

A Heparina HyperD M mantém alta capacidade de ligação, mesmo em alta velocidade linear. É comumente usado em larga escala para a produção de grau farmacêutico ATIII. As colunas da escala de produção (> 100 L) podem ser operadas em altas velocidades lineares (> 200 cm / h), mantendo a capacidade com contrapressão mínima. Sua capacidade para ATIII é superior a 25 UI / mL, mesmo a 600 cm / h, com 10 cm de altura do leito.

Validação

A heparina usada para a produção de Heparina HyperD M é de origem norte-americana e é da mucosa intestinal suína.
A heparina é produzida em conformidade com os requisitos aplicáveis dos regulamentos de Boas Práticas de Laboratório e Boas Práticas de Fabricação do FDA.

Um arquivo de validação pode ser fornecido aos clientes industriais para apoiar os requisitos regulamentares para a produção de terapias clínicas e aprovadas.

Introdução

O sorvente Lysine HyperD ™ é um sorvente preparatório por afinidade de alta velocidade e alta capacidade para a purificação de moléculas biológicas que se ligam à lisina, como o plasminogênio do plasma de espécies humanas ou animais. O sorvente fornece alta capacidade de ligação a altas taxas de fluxo.

Características e benefícios

• Alta capacidade dinâmica
• O sorvente Ridgid fornece altas taxas de fluxo

O adsorvente Lysine HyperD Affinity emprega um hidrogel de alta capacidade polimerizado dentro dos grandes poros de um cordão rígido.

Esse design combina as características desejáveis de um gel macio de alta capacidade com a estabilidade dimensional de um cordão rígido.

A capacidade de ligação dinâmica é praticamente independente da velocidade linear. Alta produtividade é obtida como resultado dessa combinação. A vedação do adsorvente é rápida devido à alta densidade das esferas.

Introdução

O sorvente de cromatografia de afinidade por corante Blue Trisacryl M é usado para a purificação de uma grande variedade de enzimas e proteínas, como cinases, interferons e alguns fatores de coagulação. Também é usado para purificação ou depleção de albumina em amostras para pesquisa proteômica.

O sorvente Blue Trisacryl M é baseado no suporte Trisacryl, um polímero sintético não iônico macroporoso no qual o corante azul é covalentemente imobilizado através de um braço espaçador de seis carbonos estável para evitar vazamento do corante em condições normais de trabalho.

Características e benefícios

• Mecanismo de interação multimodal exclusivo
• A forte ligação do corante ao sorvente evita o vazamento do corante
• Múltiplas aplicações da escala de laboratório a produção

Apresentação e armazenamento

O sorvente Blue Trisacryl M está disponível como embalagens prontas para uso, suspensas em cloreto de sódio 1 M com etanol a 20% (v / v) como bacteriostático ou em tambores para aplicações em escala de processo.

O sorvente azul Trisacryl M pode ser usado para a purificação de muitas proteínas

O sorvente Blue Trisacryl M é um adsorvente específico de grupo com afinidade por uma grande variedade de enzimas. Algumas proteínas interagem biospecificamente com o corante devido à sua similaridade estrutural com cofatores de nucleotídeos (ADP, NADP). Outras proteínas, como albumina ou interferon, se ligam por uma combinação de interações hidrofóbicas, eletrostáticas e pi-pi.

As aplicações incluem:

• Enzimas que precisam de NAD como cofator (quinases, desidrogenases, fosfatases ...)
• Outras enzimas (sulfatases, RNA polimerases, mono-oxigenases, oxidoredutases)
• Albuminas de plasma
• Transferindo do plasma
• glicoproteína ácida _α1, α-fetoproteína, inibidor da α1-proteinase
• Proteases serinas
• Interferons
• Anticorpos de DNA
• Processos de purificação de vacinas recombinantes

Principais propriedades do adsorvente azul Trisacryl M

¹  Determinado em tampão PBS usando 5 mg/mL de proteína, dimensões da coluna 16 mm I.D. x 6 cm de altura do leito, vazão de 25 cm/h

Estabilidade mecânica e química

A estabilidade química do sorvente Blue Trisacryl M é uma função da natureza sintética da matriz Trisacryl e da estabilidade aprimorada do mecanismo de acoplamento do ligante. O sorvente pode ser operado com contrapressão de até 3 bar, mantendo boas propriedades de vazão.

Capacidade

A capacidade de ligação do sorvente Blue Trisacryl M depende da proteína, da composição da matéria-prima e de parâmetros como o pH. Observe que a capacidade de uma determinada proteína pode diferir de acordo com a espécie animal (por exemplo, a capacidade de ligação da albumina bovina é menor que a da albumina humana).