Cromatografia de Troca Iônica

Introdução

Os sorventes para cromatografia de troca iônica Q, DEAE e CM Ceramic HyperD™ F são projetados usando o design proprietário 'gel-in-a-shell' que fornece rápida transferência de massa e ligação eficaz. Baseia-se em um hidrogel de alta capacidade, polimerizado dentro dos gigapores de um cordão de cerâmica rígido.

Características e benefícios

• Alta capacidade de encadernação dinâmica a altas taxas de fluxo
• Sorvente verdadeiramente rígido e não compressível
• O absorvente CM Ceramic HyperD F tolerante ao sal reduz os requisitos de Ultrafiltração / Diafiltração (UF / DF)

• Proteínas recombinantes
• Purificação de plasmídeo
• Purificação de enzimas, proteínas plasmáticas
• Vacinas
• Captura direta de anticorpos monoclonais (CM Ceramic HyperD ™ F)
• IgM

* BSA = Albumina Sérica Bovina
¹ 5 mg/mL BSA em 50 mM Tris-HCl, pH 8.6
²5 mg/mL hu IgG em 50 mM de acetato de sódio, 100 mM NaCl, pH 4.7

Introdução

Os sorventes para cromatografia de troca iônica Q, DEAE e CM Ceramic HyperD™ F  foram projetados usando o design proprietário 'gel-in-a-shell' que fornece rápida transferência de massa e ligação eficaz. Baseia-se em um hidrogel de alta capacidade, polimerizado dentro dos gigapores de um grânulo de cerâmica rígido.

Características e benefícios

• Alta capacidade de ligação dinâmica a altas taxas de fluxo
• Sorvente verdadeiramente rígido e não compressível
• O absorvente CM Ceramic HyperD F tolerante ao sal reduz os requisitos de Ultrafiltração / Diafiltração (UF / DF)

• Proteínas recombinantes
• Purificação de plasmídeo
• Purificação de enzimas, proteínas plasmáticas
• Vacinas
• Captura direta de anticorpos monoclonais (CM Ceramic HyperD ™ F)
• IgM

* BSA = Albumina Sérica Bovina
¹ 5 mg/mL BSA em 50 mM Tris-HCl, pH 8.6
²5 mg/mL hu IgG em 50 mM  de acetato de sódio, 100 mM NaCl, pH 4.7

Introdução

Os sorventes de cromatografia de troca iônica HyperD F Q, DEAE e CM Ceramic são projetados usando o design proprietário 'gel-in-a-shell' que fornece transferência rápida de massa e ligação eficaz. Baseia-se em um hidrogel de alta capacidade, polimerizado dentro dos gigapores de um grânulo de cerâmica rígido.

Características e benefícios

• Alta capacidade de encadernação dinâmica a altas taxas de fluxo
• Sorvente verdadeiramente rígido e não compressível
• O absorvente CM Ceramic HyperD ™ F tolerante ao sal reduz os requisitos de Ultrafiltração / Diafiltração (UF / DF)

• Proteínas recombinantes
• Purificação de plasmídeo
• Purificação de enzimas, proteínas plasmáticas
• Vacinas
• Captura direta de anticorpos monoclonais (CM Ceramic HyperD ™ F)
• IgM

* BSA = Albumina Sérica Bovina
¹ 5 mg/mL BSA em 50 mM Tris-HCl, pH 8.6
²5 mg/mL hu IgG em 50 mM de acetato de sódio, 100 mM NaCl, pH 4.7

Adsorbente avançado da cromatografia da troca do ânion da recuperação tolerante a sal

O HyperCel STAR AX é um adsorbente de cromatografia de troca aniônica escalonável projetado para captura de proteínas de alta produtividade com condutividade moderada ou mais alta do sal (2 a 15 mS / cm), típica de matérias-primas biológicas não diluídas (por exemplo, sobrenadantes da cultura de células de mamíferos, E. coli matéria-prima, plasma, outros ...).

As aplicações incluem captura direta de proteínas recombinantes, anticorpos monoclonais e policlonais, derivados de plasma ou outros produtos farmacêuticos.

Devido à sua capacidade de capturar diretamente proteínas de fluxos de alimentação não diluídos, o adsorbente HyperCel STAR AX também pode ser usado para remoção precoce de contaminantes (ou seja, proteínas da célula hospedeira CHO), antes da purificação do alvo, ou seja, antes da captura do MAb por uma etapa de afinidade da proteína A.

O sorvente HyperCel STAR AX é fabricado em larga escala e atende às necessidades de usuários industriais e autoridades reguladoras. Este sorvente oferece:

• Alta capacidade de encadernação dinâmica (DBC) em um curto período de residência (2 minutos ou menos)
• Captura direta de proteína de matéria-prima não diluída com condutividade moderada ou alta
• Excelentes propriedades de vazão para processamento rápido de matéria-prima
• Seletividade distinta, consistente em uma ampla faixa de condutividade (2 - 15 mS / cm)
• Economia de processo aprimorada

Aplicação 1. Captura direta de albumina a partir de plasma não diluído

O objetivo é avaliar a resina HyperCel STAR AX como o primeiro passo em uma sequência de purificação em duas etapas para capturar albumina sérica humana (HSA) de plasma não diluído (condutividade 11 mS / cm). A resina HyperCel STAR AX foi usada como primeira etapa de captura, seguida por uma etapa de troca catiônica ortogonal realizada na resina S HyperCel, sem ajuste de pH ou condutividade do plasma. O plasma não diluído puro (pH 7,6, 11mS / cm) foi carregado com DBC de 30 mg / mL.

O Projeto de Experimentos (DoE) em placas de filtro de 96 poços foi realizado para determinar as condições ideais para alcançar a melhor relação rendimento / pureza.

Estas condições foram então transferidas para cromatografia em coluna em colunas pré-embaladas da RPC.

As condições determinadas em placas de 96 poços foram aplicadas à cromatografia de plasma não diluído em resina HyperCel STAR AX em uma coluna pré-embalada de 1 mL de PRC. As análises de cromatograma e SDS-PAGE das frações confirmaram que a maioria dos contaminantes foi eliminada por lavagem de alta condutividade, levando a uma fração de HSA 99% pura em uma única etapa, com rendimento de 90%.

Além disso, a resina HyperCel STAR AX usada na etapa de captura com plasma não diluído apresentava um DBC> 30 mg / mL, mais de 2 vezes maior que o de uma resina convencional de agarose DEAE testada nessas condições.

A HSA foi eluída por uma simples diminuição de pH (4,0), sem adição de sal, permitindo uma carga direta em uma coluna de troca catiônica ortogonal (resina S HyperCel).

Esta última etapa de polimento na resina S HyperCel levou a uma fração purificada de HSA eluída em pH 7,0 com pureza> 99% e capacidade em torno de 65 mg / mL.

Aplicação 2. Remoção precoce de CHOPs antes da captura da proteína A de um anticorpo monoclonal (MAb)

O objetivo deste estudo foi avaliar o impacto de uma etapa de pré-purificação usando a resina HyperCel STAR AX antes da captura convencional de resina de proteína A de um anticorpo monoclonal (MAb) da matéria-prima da cultura de células de mamíferos.

O conteúdo de CHOPs contaminantes (proteínas de ovário de hamster chinês) foi comparado usando um ensaio comercial ELISA para os dois esquemas de purificação.

Os dados mostram que o uso da resina HyperCel STAR AX antes da proteína A resulta em uma melhor redução de CHOP (> 8 vezes). Devido a esse efeito sinérgico, a partir de um conteúdo inicial de proteína de célula hospedeira (HCP) de 413.000 ppm, o nível final de CHOP é reduzido para ~ 400 ppm (redução de 3 log), com uma recuperação de MAb de 90%.

Uma etapa de pré-purificação pode impactar positivamente a economia do processo, prolongando a vida útil de uma coluna de proteína A dispendiosa usada como etapa padrão para a captura de MAb.

O adsorvente HyperCel STAR AX é composto por uma matriz rígida de celulose que possui excelentes propriedades de fluxo e gera baixa contrapressão, compatível com as necessidades da produção de proteínas em escala de fabricação. O adsorvente está disponível em uma variedade de configurações de embalagem, bem como nas convenientes colunas pré-embaladas PRC de 1 e 5 mL, projetadas para otimização rápida de métodos, triagem de seletividade ou pequenos trabalhos preparatórios. O sorvente HyperCel STAR AX é fornecido como uma pasta / suspensão em NaCl 1 M contendo 20% (v / v) de etanol ou como um bolo úmido para aplicações em escala de processo (o sorvente úmido do bolo facilita a transferência do sorvente, evitando a agitação e suspensão de grandes volumes de material).

O adsorvente HyperCel STAR AX possui uma estabilidade química que garante limpeza simples no local (CIP) e armazenamento. Para CIP padrão, recomenda-se o tratamento de NaOH 0,5 a 1 M, enquanto é possível o armazenamento a longo prazo em NaOH 10 a 100 mM.

Principais propriedades

¹ Determinado usando um BSA de 5 mg / mL em Tris-HCl 25 mM, NaCl 0,14 M em tempo de residência de 2 minutos.

² Injeção de 5 volumes de coluna (CV) de 0,5 - 1 M NaOH, 1 hora de tempo de contato.

Resina HyperCel STAR AX

Colunas pré-embaladas HyperCel STAR AX PRC