Introducción

Los sorbentes de cromatografía de intercambio iónico Q, DEAE y CM Ceramic HyperD ™ F están diseñados con el diseño patentado 'gel-in-a-shell' que proporciona una transferencia de masa rápida y una unión efectiva. Se basa en un hidrogel de alta capacidad, polimerizado dentro de los gigapores de una cuenta de cerámica rígida.

Características y Beneficios

• Alta capacidad de unión dinámica a altos caudales
• Sorbente verdaderamente rígido, no comprimible
• El sorbente CM Ceramic HyperD F tolerante a la sal reduce los requisitos de ultrafiltración / diafiltración (UF / DF)

• Proteínas recombinantes
• Purificación de plásmidos
• Purificación de enzimas, proteínas plasmáticas.
• Vacunas
• Captura directa de anticuerpos monoclonales (CM Ceramic HyperD ™ F)
• IgM

* BSA = Bovine Serum Albumin
¹ 5 mg/mL BSA in 50 mM Tris-HCl, pH 8.6
²5 mg/mL hu IgG in 50 mM sodium acetate, 100 mM NaCl, pH 4.7

Introducción

Los sorbentes de cromatografía de intercambio iónico Q, DEAE y CM Ceramic HyperD ™ F están diseñados con el diseño patentado 'gel-in-a-shell' que proporciona una transferencia de masa rápida y una unión efectiva. Se basa en un hidrogel de alta capacidad, polimerizado dentro de los gigapores de una cuenta de cerámica rígida.

Características y Beneficios

• Alta capacidad de unión dinámica a altos caudales
• Sorbente verdaderamente rígido, no comprimible
• El sorbente CM Ceramic HyperD F tolerante a la sal reduce los requisitos de ultrafiltración / diafiltración (UF / DF)

• Proteínas recombinantes
• Proteínas recombinantes
• Purificación de enzimas, proteínas plasmáticas.
• Vacunas
• Captura directa de anticuerpos monoclonales (CM Ceramic HyperD ™ F)
• IgM

* BSA = Bovine Serum Albumin
¹ 5 mg/mL BSA in 50 mM Tris-HCl, pH 8.6
²5 mg/mL hu IgG in 50 mM sodium acetate, 100 mM NaCl, pH 4.7

Introducción

Los sorbentes de cromatografía de intercambio iónico Q, DEAE y CM Ceramic HyperD F están diseñados con el diseño patentado 'gel-in-a-shell' que proporciona transferencia de masa rápida y unión efectiva. Se basa en un hidrogel de alta capacidad, polimerizado dentro de los gigapores de una cuenta de cerámica rígida.

Características y Beneficios

• Alta capacidad de unión dinámica a altos caudales
• Sorbente verdaderamente rígido, no comprimible
• El sorbente CM Ceramic HyperD F tolerante a la sal reduce los requisitos de ultrafiltración / diafiltración (UF / DF)

• Proteínas recombinantes
• Purificación de plásmidos
• Purificación de enzimas, proteínas plasmáticas.
• Vacunas
• Captura directa de anticuerpos monoclonales (CM Ceramic HyperD ™ F)
• IgM

* BSA = Bovine Serum Albumin
¹ 5 mg/mL BSA in 50 mM Tris-HCl, pH 8.6
²5 mg/mL hu IgG in 50 mM sodium acetate, 100 mM NaCl, pH 4.7

Sorbente de cromatografía de intercambio aniónico de recuperación avanzada tolerante a la sal

El sorbente HyperCel STAR AX es un sorbente de cromatografía de intercambio aniónico escalable en la industria diseñado para la captura de proteínas de alta productividad con conductividad salina moderada o superior (2 a 15 mS / cm), típico de materias primas biológicas no diluidas (es decir, sobrenadantes de cultivos de células de mamíferos, E. coli materia prima, plasma, otros ...).

Las aplicaciones incluyen la captura directa de proteínas recombinantes, anticuerpos monoclonales y policlonales, derivados plasmáticos u otros productos biofarmacéuticos.

Debido a su capacidad para capturar directamente proteínas de los flujos de alimentación no diluidos, el sorbente HyperCel STAR AX también se puede utilizar para la eliminación temprana de contaminantes (es decir, proteínas de células huésped CHO), antes de la purificación objetivo, es decir, antes de la captura de MAb por un paso de afinidad de proteína A.

El sorbente HyperCel STAR AX se fabrica a gran escala y satisface las necesidades de los usuarios industriales y las autoridades reguladoras. Este sorbente ofrece:

• Alta capacidad de unión dinámica (DBC) a corto tiempo de residencia (2 minutos o menos)
• Captura directa de proteína de materia prima sin diluir a conductividad moderada o alta
• Excelentes propiedades de caudal para un procesamiento rápido de la materia prima
• Selectividad distintiva, consistente en un amplio rango de conductividad (2 - 15 mS / cm)
• Procesos económicos mejorados

Aplicación 1. Captura directa de albúmina de plasma no diluido

El objetivo es evaluar la resina HyperCel STAR AX como el primer paso en una secuencia de purificación de dos pasos para capturar la albúmina sérica humana (HSA) del plasma no diluido (conductividad 11 mS / cm). La resina HyperCel STAR AX se usó como un primer paso de captura, seguido de un paso de intercambio catiónico ortogonal realizado en resina S HyperCel, sin ajuste de pH o conductividad del plasma. El plasma puro sin diluir (pH 7,6, 11 mS / cm) se cargó con DBC de 30 mg / ml.

El diseño de experimentos (DoE) en placas de filtro de 96 pocillos se realizó para determinar las condiciones óptimas para lograr la mejor relación rendimiento / pureza.

Estas condiciones se transfirieron luego a cromatografía en columna en columnas preempaquetadas de PRC.

Las condiciones determinadas en placas de 96 pocillos se aplicaron a la cromatografía de plasma sin diluir en resina HyperCel STAR AX en una columna preenvasada PRC de 1 ml. El análisis por cromatograma y SDS-PAGE de las fracciones confirmó que la mayoría de los contaminantes se eliminaron mediante lavado de alta conductividad, lo que condujo a una fracción de HSA pura al 99% en un solo paso, con un rendimiento del 90%.

Además, la resina HyperCel STAR AX utilizada en la etapa de captura con plasma sin diluir tenía un DBC> 30 mg / ml, más de 2 veces mayor que el de una resina de agarosa DEAE convencional probada en estas condiciones.

El HSA se eluyó mediante una simple disminución del pH (4.0), sin adición de sal, lo que permitió una carga directa en una columna de intercambio catiónico ortogonal (resina S HyperCel). 

Este último paso de pulido en resina S HyperCel condujo a una fracción purificada de HSA eluida a pH 7,0 con pureza> 99%, y una capacidad de alrededor de 65 mg / ml.

Aplicación 2. Eliminación temprana de CHOP antes de la captura de proteína A de un anticuerpo monoclonal (MAb)

El objetivo de este estudio fue evaluar el impacto de un paso de pre-purificación utilizando la resina HyperCel STAR AX antes de la captura de resina de proteína A convencional de un anticuerpo monoclonal (MAb) de la alimentación de cultivos de células de mamíferos. 

El contenido de CHOP contaminantes (proteínas de ovario de hámster chino) se comparó utilizando un ensayo ELISA comercial para los dos esquemas de purificación.

Los datos muestran que el uso de la resina HyperCel STAR AX antes de la proteína A da como resultado una mejor reducción de CHOP (> 8 veces). Debido a este efecto sinérgico, a partir de un contenido inicial de proteína de la célula huésped (HCP) de 413,000 ppm, el nivel final de CHOP se reduce a ∼400 ppm (reducción de 3 log), con una recuperación de MAb del 90%.

Un paso de prepurificación puede impactar positivamente en la economía del proceso al extender la vida útil de una costosa columna de proteína A utilizada como paso estándar para la captura de MAb.

El sorbente HyperCel STAR AX está compuesto por una matriz de celulosa rígida que tiene excelentes propiedades de flujo y genera baja contrapresión, compatible con las necesidades de producción de proteínas a escala industrial. El sorbente está disponible en una variedad de configuraciones de empaque, así como en cómodas columnas preempaquetadas de PRC de 1 ml y 5 ml diseñadas para la optimización rápida del método, la detección de selectividad o el trabajo preparatorio pequeño. El sorbente HyperCel STAR AX se suministra como suspensión / suspensión en NaCl 1 M que contiene etanol al 20% (v / v) o como una torta húmeda para aplicaciones a escala de proceso (el sorbente de torta húmeda facilita la transferencia del sorbente, evitando la agitación y suspensión de grandes volúmenes de material).

El sorbente HyperCel STAR AX tiene una estabilidad química que garantiza una simple limpieza en el lugar (CIP) y almacenamiento. Para el CIP estándar, se recomienda un tratamiento de NaOH de 0,5 a 1 M, mientras que es posible el almacenamiento a largo plazo en NaOH de 10 a 100 mM.

Principales propiedades

¹ Determined using a 5 mg/mL BSA in 25 mM Tris-HCl , 0.14 M NaCl at 2 minute residence time.

² Injection of 5 column volumes (CV) of 0.5 – 1 M NaOH, 1 hour contact time.

Resina HyperCel STAR AX 

Columnas preempaquetadas HyperCel STAR AX PRC