Cromatografía de afinidad
La cromatografía de afinidad se usa para capturar moléculas por interacción específica entre el ligando de cromatografía y el objetivo. Esto permite la eliminación de contaminantes importantes a baja concentración en un solo paso del proceso. La cromatografía de afinidad se usa con frecuencia para la purificación aguas abajo de proteínas y vacunas. Sartorius ofrece una amplia selección de resinas y membranas para este propósito.
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Las resinas de afinidad HyperD y Trisacryl están diseñadas para capturar proteínas de sobrenadantes de cultivos celulares y lisados bacterianos.
Atributos | Heparin HyperD | Lysine HyperD | Blue Trisacryl |
|---|---|---|---|
Tamaño de párticula | 80 µm | 70 µm | 40 – 80 µm |
Capacidad de enlace dinámico (10 % BT) | > 25 mg/mL | - | > 10 mg/mL |
Operando pH | 3 – 13 | 3 - 13 | 4 - 10 |
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Sartorius ofrece membranas para cromatografía de afinidad para investigación y desarrollo de procesos a escala. Estos adsorbentes de membrana están listos para usar y le ahorran tiempo. Cambie a cromatografía de un solo uso y elimine los pasos de empaque, limpieza y revalidación.
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Resinas de afinidad
Heparina HyperD
La resina de heparina HyperD es adecuada para la purificación de proteínas de unión a heparina como factores de coagulación, hormonas de crecimiento, lipoproteínas y enzimas de procesamiento de ADN / ARN.
Introducción
El sorbente de cromatografía compuesta Heparin HyperD ™ M es un sorbente preparativo de afinidad diseñado para la purificación de moléculas biológicas que se unen a la heparina, como factores de coagulación, factores de crecimiento, lipoproteínas ... El sorbente proporciona una alta capacidad de unión a altas velocidades de flujo. La estructura compuesta única de Heparin HyperD M fue elegida para proporcionar una capacidad dinámica superior a altas velocidades lineales.
El sorbente "gel-in-a-shell" de Heparin HyperD está compuesto por un cordón mineral rígido poroso que contiene poros rellenos de hidrogel unidos a heparina. La heparina HyperD M tiene un tamaño de partícula promedio de 80 µm y se usa para la purificación a escala preparativa de ATIII. El sorbente se puede envasar en tamaños de columna desde ml hasta más de cien litros y funcionar a altos caudales con baja contrapresión. La fuga de heparina se minimiza debido al enlace químico estable de la molécula de heparina al sorbente.
La heparina HyperD M está disponible como paquetes de laboratorio listos para usar suspendidos en cloruro de sodio 1 M con etanol al 20% como bacteriostático. Grandes cantidades a granel también están disponibles a pedido.
Features and Benefits
- High dynamic binding capacity at high linear flow rate
- Reference method for large-scale purification of Antithrombin III (AT III)
- Purification of various proteins from laboratory to production scale
Aplicaciones de sorbente de afinidad Heparin HyperD ™ M
La heparina es un mucopolisacárido conocido por sus acciones anticoagulantes y clarificantes, y está compuesto de cantidades equimolares de glucosamina y ácido glucurónico, alternativamente unidos por enlaces glucosicos alfa-1,4.
Un cierto número de sus grupos hidroxilo están esterificados con ácido sulfúrico, especialmente aquellos en C-6 de glucosamina. Otros grupos también están sulfatados, incluyendo C-3 de glucosamina y C-2 de ácido glucurónico. La característica principal de la heparina es que contiene una gran cantidad de grupos amino combinados con grupos sulfato, siendo este último bastante lábil en medio ácido.
La molécula contiene pequeñas cantidades de otro azúcar, como galactosa y xilosa, y aminoácidos. Como resultado de su composición y su función bioquímica, la heparina tiene la propiedad de combinarse con una serie de proteínas, enzimas y, en general, con compuestos orgánicos policatiónicos. También se combina con alcaloides, antibióticos, manchas y hormonas.
Las principales aplicaciones incluyen
- Método de referencia para la purificación a gran escala de antitrombina III (ATIII)
- Otros factores de coagulación como Factor IX, Factor VII, Factor XI, Factor XII y XIIa
- Purificación de lipoproteínas lipasas
- Lipoproteínas (LDL, VLDL, apoproteína VLDL, HDL)
- Hormonas de crecimiento
- Factores de crecimiento: FGF (factor de crecimiento de fibroblastos), ECGF
- Enzimas relacionadas con ADN y ARN
- Purificación de varias otras enzimas (colagenasa, α-L-iduronidasa, hialuronidasa y lisozima), fibronectina, fragmentos de fibronectina y receptores de hormonas
Propiedades principales del sorbente de afinidad HyperD M de heparina
| Tamaño de partícula | 80 µm (av.) |
Capacidad de unión dinámica para hu ATIII (600 cm/h) | > 25 mg/mL |
| Unión | Heparina poricna |
Rango de pH operativo recomendado | 3 – 13 |
Cambios de volumen debido al pH y la fuerza iónica | No comprendido |
Resistencia a la presión | 70 bar (1,000 psi) |
*Capacity determined using hu ATIII at 72.5 UI/ml in 20 mM Tris-HCl, 0.3 M NaCl, pH 7.4. Elution with 20 mM Tris-HCl, 2 M NaCl, pH 7.4 at 600 cm/h, 10 cm bed height
Estabilidad Química y Mecánica
La estabilidad del pH es la misma que para la heparina soluble libre: entre 3 y 13. Los agentes disociantes y los detergentes generalmente no tienen efecto sobre el sorbente de heparina. La heparina HyperD M se puede limpiar con hidróxido de sodio en concentraciones de 0.01 a 0.1 M.
La matriz HyperD no compresible puede soportar caudales muy altos sin ningún riesgo de colapso del lecho. Como resultado, la heparina HyperD M ahorra tiempo al usuario y preserva la integridad biológica de las proteínas purificadas. Las propiedades mecánicas del sorbente Heparin HyperD M permanecen constantes en un amplio rango de velocidades. La caída de presión mínima, incluso a alta velocidad lineal, asegura una escala directa y predecible hasta cualquier volumen.
Capacidad
La heparina HyperD M mantiene una alta capacidad de unión, incluso a alta velocidad lineal. Se usa comúnmente a gran escala para la producción de ATIII de grado farmacéutico. Las columnas de escala de producción (> 100 L) se pueden operar a altas velocidades lineales (> 200 cm / h) mientras se mantiene la capacidad con una contrapresión mínima. Su capacidad para ATIII es superior a 25 UI / mL incluso a 600 cm / h con una altura de lecho de 10 cm.
Validación
La heparina utilizada para la producción de heparina HyperD M tiene un origen norteamericano y proviene de la mucosa intestinal porcina.
La heparina se produce de conformidad con los requisitos aplicables de las regulaciones de Buenas Prácticas de Laboratorio y Buenas Prácticas de Fabricación de la FDA.
Se puede proporcionar un archivo de validación a los clientes industriales para respaldar los requisitos reglamentarios para la producción de terapias clínicas y aprobadas.
Heparin HyperD Affinity Sorbent | |
Descripción | Número de partida |
25 mL | 20029-039 |
| 100 mL | 20029-021 |
1 L | 20029-013 |
10 L | 20029-054 |
Lisina HyperD
La resina de afinidad lisina HyperD se utiliza para la purificación de proteínas de unión a lisina como el plasminógeno. Proporciona altas capacidades de unión a proteínas a altos caudales.
Introducción
El sorbente Lysine HyperD ™ es un sorbente preparativo de afinidad de alta velocidad y alta capacidad para la purificación de moléculas biológicas que se unen a la lisina, como el plasminógeno del plasma de especies humanas o animales. El sorbente proporciona una alta capacidad de unión a altos caudales.
Características y Beneficios
- Alta capacidad dinámica
- El sorbente rígido proporciona altos caudales
| Tamaño de partícula | 70 µm (av.) |
Unión | L-Lysine |
Rango de pH operativo recomendado | 3 – 13 |
Cambios de volumen debido al pH y la fuerza iónica | No comprendido |
Resistencia a la presión | 70 bar (1,000 psi) |
El sorbente de lisina HyperD Affinity emplea un hidrogel de alta capacidad polimerizado dentro de los poros grandes de un cordón rígido.
Este diseño combina las características deseables de un gel suave de alta capacidad con la estabilidad dimensional de un cordón rígido.
La capacidad de unión dinámica es prácticamente independiente de la velocidad lineal. Se obtiene una alta productividad como resultado de esta combinación. El empaque sorbente es rápido debido a la alta densidad de las perlas.
Lysine HyperD Affinity Sorbent | |
Descripción | Número de partida |
25 mL | 20059-036 |
100 mL | 20059-028 |
Trisacryl Azul
Blue Trisacryl es una resina de afinidad que se utiliza para la purificación de enzimas, interferonas y algunos factores de coagulación, así como para la eliminación de la albúmina. La resina utiliza un grano a base de Trisacryl que lleva el ligando de tinte azul.
Introduction
El sorbente de cromatografía de afinidad de colorante Blue Trisacryl M se usa para la purificación de una amplia variedad de enzimas y proteínas tales como quinasas, interferones y algunos factores de coagulación. También se utiliza para la purificación de albúmina o el agotamiento de la albúmina en muestras para investigación proteómica.
El sorbente Blue Trisacryl M se basa en el soporte Trisacryl, un polímero sintético macroporoso no iónico en el que el colorante azul se inmoviliza covalentemente a través de un brazo espaciador estable de seis carbonos para evitar fugas del colorante en condiciones normales de trabajo.
Características y Beneficios
- Mecanismo único de interacción multimodal
- Una fuerte unión de tinte a sorbente evita la fuga del tinte
- Múltiples aplicaciones de laboratorio a escala de producción.
Presentación y almacenamiento
El sorbente Blue Trisacryl M está disponible como paquetes de laboratorio listos para usar suspendidos en cloruro de sodio 1 M con etanol al 20% (v / v) como bacteriostático, o en tambores para aplicaciones a escala de proceso.
El sorbente Blue Trisacryl M puede usarse para la purificación de muchas proteínas
El sorbente azul Trisacryl M es un adsorbente específico de grupo con afinidad por una amplia variedad de enzimas. Algunas proteínas interactúan bioespecíficamente con el colorante debido a su similitud estructural con cofactores de nucleótidos (ADP, NADP). Otras proteínas como la albúmina o el interferón se unen mediante una combinación de interacciones hidrofóbicas, electrostáticas y pi-pi.
Las aplicaciones incluyen:
- Enzimas que necesitan NAD como cofactor (quinasas, deshidrogenasas, fosfatasas ...)
- Otras enzimas (sulfatasas, ARN polimerasas, monooxigenasas, oxidorductasas)
- Albúminas del plasma
- Transferencia de plasma
- _α1-acid glycoprotein, α-fetoprotein, α1-proteinase inhibitor
- Serina proteasas
- Interferones
- Anticuerpos de ADN
- Procesos de purificación de vacunas recombinantes
Principales propiedades del sorbente azul Trisacryl M
Tamaño de partícula | 40 – 80 μm |
Unión | Blue dye |
Límite de exclusión | 107 Da |
| Capacidad para la albúmina humana1 | ≥10 mg/mL |
Estabilidad termal | 2 a 121 °C |
Trabajo sobre pH | 4 a 10 |
pH de limpieza | 1 a 12 (corto plazo) |
Presión a 100 cm / h. | Up to 3 bar (45 psi) |
1 Determined in PBS buffer using 5 mg/mL protein, column dimensions 16 mm I.D. x 6 cm bed height, flow rate 25 cm/hr
Estabilidad Química y Mecánica
La estabilidad química del sorbente azul Trisacryl M es una función de la naturaleza sintética de la matriz Trisacryl y la estabilidad mejorada del mecanismo de acoplamiento del ligando. El sorbente puede funcionar con una contrapresión de hasta 3 bar mientras se mantienen buenas propiedades de velocidad de flujo.
Capacidad
La capacidad de unión del sorbente Blue Trisacryl M depende de la proteína, la composición de la materia prima y parámetros tales como el pH. Tenga en cuenta que la capacidad para una proteína dada puede diferir según la especie animal (por ejemplo, la capacidad de unión para la albúmina bovina es menor que para la albúmina humana).
Blue Trisacryl M Sorbent | |
Descripción | Número de partida |
25 mL | 25896-045 |
100 mL | 25896-010 |
1 L | 25896-028 |
5 L | 25896-044 |
10 L | 25896-036 |
Membranas de afinidad
Sartobind® SC
Los beneficios de los adsorbedores de membrana de alto rendimiento, como la reducción del tiempo y los amortiguadores, ahora se pueden experimentar con la membrana Sartbind SC. Ideal para la captura de impurezas, como las proteínas de la célula huésped y el ADN, esta membrana está disponible en nano tamaños y es muy adecuada para reemplazar columnas en el desarrollo de procesos y uso en investigación.
