Preparación: Contaminación del paso, expansión y cultivo celular
La preparación de cultivos celulares comprende las técnicas fundamentales necesarias para garantizar la confianza en los resultados experimentales. La calidad de sus cultivos celulares se traduce directamente en la reproducibilidad de sus experimentos. Algunas consideraciones fundamentales de preparación incluyen:
- Prevención de la contaminación, sin importar la escala de su cultivo
- Técnica estéril para la preparación de medios y reactivos y para el paso estéril de células
- Técnicas y soluciones efectivas para congelar y descongelar líneas celulares.
Para obtener conocimientos biológicos en los que puede confiar, ofrecemos herramientas de cultivo celular que le permiten preparar el escenario para datos experimentales fiables, mejorar su productividad y / o asegurarse de que está eligiendo las soluciones adecuadas.
Preparación de medios
El medio de cultivo celular que elija es uno de los aspectos más importantes de su diseño experimental. Su elección debe depender del tipo de células que se cultivarán y del propósito del cultivo. Las diferentes líneas y tipos de células tienen requisitos de crecimiento muy específicos, y se encuentran disponibles varias formulaciones de medios para satisfacer los requisitos de crecimiento de las células que ha elegido. Puede comprar medios ya preparados o prepararlos a partir de un formulario en su laboratorio. En este último caso, el agua es un componente importante de los medios, tampones y aditivos que usa con sus células, y la calidad del agua juega un papel vital en cualquier experimento de cultivo celular.
Use agua de alta calidad que esté libre de contaminantes para asegurarse de que sus células estén sanas y se comporten de manera consistente de un experimento al siguiente.
La contaminación por sustancias químicas u otros agentes biológicos que son indetectables a simple vista, como endotoxinas, iones inorgánicos y compuestos orgánicos, puede afectar el crecimiento, la morfología y el comportamiento de las células. El agua de red típica contiene de 1 a 10 UI / ml de contaminación por endotoxina, pero los estándares internacionales <link> dictan <0,1 UI / ml de contaminación por endotoxina en el agua de cultivo celular. Esto significa que su sistema de purificación de agua necesita eliminar esta endotoxina del agua que usa para su cultivo celular. El uso del sistema de filtración de agua adecuado lo ayuda a desarrollar células sanas para experimentos de cultivo celular consistentes y reproducibles.
Nuestras herramientas para hacer que la preparación de sus medios y tampones sea confiable y libre de contaminación
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Paso de células
Ya sea que esté trabajando con líneas adherentes o en suspensión, las células cultivadas deben pasar o subcultivarse regularmente. Desafortunadamente, el paso presenta un desafío de contaminación porque se abre el matraz de cultivo, se manipulan las células y se agregan nuevos medios y componentes. Todos estos pasos permiten la posibilidad de introducir contaminantes.
Seguir una técnica aséptica adecuada, trabajar rápidamente y usar las mejores herramientas y reactivos no contaminados ayudará a reducir la posibilidad de introducir contaminantes en sus cultivos celulares. En particular, es esencial utilizar una técnica de pipeteo aséptico adecuada, con pipetas con filtro estériles y puntas de pipeta que le permitan trabajar de manera rápida y eficiente.
Carteles científicos:
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Evitar la contaminación
Detenga la contaminación antes de que detenga su experimento. Uno de los principales desafíos en el cultivo celular es el riesgo de contaminación. La contaminación se presenta de muchas formas: bacterias, levaduras, moho, productos químicos, otros agentes biológicos, contaminación cruzada de líneas celulares o una combinación de las anteriores. La contaminación puede afectar el crecimiento, la morfología y el comportamiento de sus células y, en última instancia, comprometer sus resultados experimentales y / o frenar su proyecto.
Células de paso completamente fuera de la cubierta: evite la introducción de contaminantes y mejore la eficiencia
Puede pasar las células de forma aséptica sin necesidad de abrir un matraz o entrar en una campana, con nuestro innovador sistema de expansión de células. Para evitar la contaminación durante los pasos fuera de la cubierta de bioseguridad, este sistema combina un tubo para la transferencia aséptica de fluidos y un cartucho de filtro para el intercambio de gases en la tapa premontada en matraces de agitación de plástico Erlenmeyer.
Observará tasas de crecimiento equivalentes entre nuestro sistema MYCAP CCX y los matraces Erlenmeyer tradicionales. El llenado de medios, la inoculación, el muestreo y la transferencia desde los matraces se pueden realizar de forma aséptica fuera de la cabina de bioseguridad mediante el uso de soldadores de tubos o conectores asépticos.
Elimina la necesidad de matraces de respaldo y pasajes redundantes
Las características del sistema MYCAP CCX le permiten eliminar casi por completo los riesgos de contaminación durante el paso, lo que significa resultados más consistentes y una mayor eficiencia, independientemente de la escala de sus experimentos. Elimine la necesidad de un gabinete de bioseguridad durante el paso, lo que reduce sus costos experimentales y agiliza sus operaciones.
Herramientas que detienen la contaminación bacteriana y por micoplasmas
Contaminación bacteriana
Las bacterias son los contaminantes más comunes. La contaminación bacteriana suele ser visualmente evidente: el cultivo se vuelve turbio o turbio y / o el color del medio cambia, lo que indica una caída del pH. La mayoría de las bacterias también son visibles al microscopio.
Una vez que se ha observado contaminación bacteriana, se debe reemplazar el cultivo y comenzar la descontaminación, un proceso costoso y que requiere mucho tiempo.
Para evitar la contaminación bacteriana:
- Sea diligente con su técnica
- Utilice solo reactivos estériles
- Tenga cuidado con las existencias de laboratorio generales
- Utilice filtración estéril
- Use agua fresca ultrapura para sus existencias
Contaminación por micoplasma
Los micoplasmas son pequeños (0,15 µm-0,3 µm), sin pared celular y con una membrana flexible. Estas características hacen que la contaminación por micoplasma sea difícil de detectar con un microscopio. Su pequeño tamaño les permite proliferar a altas concentraciones sin ningún cambio obvio en la apariencia del cultivo.
La eliminación de la contaminación por micoplasma de un cultivo es casi imposible. Son resistentes a la mayoría de los antibióticos y pueden sobrevivir al nitrógeno líquido sin criopreservación, lo que les permite contaminar otras células almacenadas en el mismo recipiente de nitrógeno líquido.
El uso de una prueba específica de micoplsma en sus cultivos celulares le permite saber inmediatamente si sus células están contaminadas, evitando la pérdida de tiempo, reactivos y esfuerzo.
Para prevenir la contaminación por micoplasmas de sus líneas celulares:
- Probar cultivos de forma rutinaria
- Poner en cuarentena y probar cualquier cultivo nuevo de fuentes externas
- Desechar cultivos positivos para micoplasma
