Caracterização de Afinidade e Cinética

Etiqueta de afinidade livre e caracterização cinética

Caracterização Cinética

Estabelecer a cinética de ligação entre duas ou mais moléculas biológicas ou pequenas é a chave para compreender a formação do complexo molecular e pode ajudar na elucidação dos mecanismos de ligação ligante-receptor e estabilidade durante o desenvolvimento de moléculas de drogas biológicas. Dois sistemas com a mesma afinidade podem exibir mecanismos de ligação completamente diferentes. Portanto, a avaliação das constantes de afinidade em conjunto com as taxas de associação e dissociação de ligação é crucial no processo de seleção de candidatos a drogas ideais. Os ensaios de octeto tornaram-se cada vez mais populares para caracterização de afinidade de biomoléculas devido à sua capacidade de fornecer informações mais detalhadas na cinética de ligação de biomoléculas.

Características

Caracterização da Cinética de Grandes Moléculas

A família de instrumentos Octet mede com precisão constantes cinéticas trazendo a superfície de detecção diretamente para a amostra, eliminando a necessidade de microfluídicos. Esta abordagem única, que utiliza análises em tempo real sem rótulos, otimiza o fluxo de trabalho do laboratório e acelera o desenvolvimento do ensaio. Ele permite a medição direta de amostras brutas, minimizando a manutenção do instrumento. É extremamente versátil na caracterização cinética de moléculas grandes e permite a otimização de ensaio rápido para permitir a análise de moléculas que variam de proteínas recombinantes e anticorpos a vírus e nanopartículas.

Fc Receptor Binding Assays diagram

Ensaios de ligação do receptor Fc no sistema de octeto

A seleção de agentes terapêuticos baseados em anticorpos desejados é frequentemente baseada em suas propriedades de ligação, incluindo a ligação a FcγRs. Os anticorpos são às vezes projetados para atingir as propriedades de ligação de FcγRs desejadas, pois sua segurança e eficácia podem ser grandemente afetadas por sua ligação ao alvo e aos FcγRs.

  • Os sistemas de octeto oferecem alto rendimento e métodos sensíveis para análise de ligação ao receptor Fc
  • Uma variedade de superfícies de biossensores estão disponíveis e permitem flexibilidade e otimização rápida do formato do ensaio

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Proteína - Cinética de moléculas pequenas

A descoberta de moléculas pequenas e moléculas líderes de peptídeos pode derivar de muitas fontes, incluindo triagem de fragmentos, triagem de alto rendimento e projeto estrutural de novo, entre outras. A determinação e avaliação da afinidade de ligação de moléculas pequenas a um alvo terapêutico é um componente significativo do processo de descoberta de drogas e otimização de chumbo. O processo de otimização hit-to-lead e lead são essenciais para determinar com precisão a potência biológica in vitro para que as relações estrutura-atividade (SAR) possam ser usadas para um projeto estrutural eficiente. Saiba como as plataformas Octet RED96e, Octet RED384, Octet HTX e Pioneer SPR podem ser usadas para caracterizar a ligação de moléculas pequenas e peptídeo-proteína.

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Interações de alta afinidade

A caracterização da ligação ao alvo é uma etapa analítica essencial para a seleção de produtos biológicos de alta afinidade e altamente específicos, independentemente dos tipos de moléculas. A caracterização de moléculas biológicas com afinidade relativamente alta entre si (KD <1 nM) é, no entanto, muitas vezes bastante desafiadora devido em parte à necessidade de plataformas analíticas de alta sensibilidade que são capazes de detectar mudanças leves nas respostas. O Pioneer SPR é um instrumento de alta sensibilidade que utiliza injeções de SPR de próxima geração para melhorar a eficiência do processo de caracterização, determinando a cinética e a afinidade em uma única etapa. A injeção de gradiente OneStep de próxima geração apresentada na plataforma Pioneer aumenta drasticamente a velocidade de caracterização de afinidade, mantendo a precisão e alta confiança nos resultados.

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Cover: Characterizing Membrane Protein Interactions by Bio-Layer Interferometry

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