Preparação: Passagem Celular, Expansão e Contaminação de Cultura
A preparação da cultura de células engloba as técnicas fundamentais necessárias para garantir a confiança nos resultados experimentais. A qualidade de suas culturas de células se traduz diretamente na reprodutibilidade de seus experimentos. Algumas considerações fundamentais de preparação incluem:
- Prevenção de contaminação - não importa a escala de sua cultura
- Técnica estéril para a preparação de meios e reagentes e para a passagem estéril de células
- Técnicas e soluções eficazes para congelamento e descongelamento de linhas celulares
Para percepções biológicas em que você pode confiar, oferecemos ferramentas de cultura de células que permitem definir o cenário para dados experimentais confiáveis, melhorar sua produtividade e / ou garantir que você está escolhendo as soluções certas.
O meio de cultura de células que você escolher é um dos aspectos mais importantes do seu projeto experimental. Sua escolha deve depender do tipo de células a serem cultivadas e da finalidade da cultura celular. Diferentes linhas de células e tipos de células têm requisitos de crescimento altamente específicos, e uma série de formulações de mios de cultura estão disponíveis para atender aos requisitos de crescimento das células que você escolheu. Você pode comprar o meio de cultura pronto ou prepará-lo em um formulário eletrônico em seu laboratório. No último caso, a água é o principal componente do meio de cultura, tampões e aditivos que você usa com as células, e a qualidade da água desempenha um papel vital em qualquer experimento de cultura celular.
Use água de alta qualidade livre de contaminantes para garantir que suas células estejam saudáveis e se comportem de maneira consistente de um experimento para o outro.
A contaminação por produtos químicos ou outros agentes biológicos indetectáveis a olho nu, como endotoxinas, íons inorgânicos e compostos orgânicos, pode afetar o crescimento, a morfologia e o comportamento das células. A água da rede típica contém 1-10 IU / mL de contaminação por endotoxina, mas os padrões internacionais <link> ditam <0,1 IU / mL de contaminação por endotoxina na água de cultura de células. Isso significa que seu sistema de purificação de água precisa eliminar essa endotoxina da água que você usa para a cultura de células. Usar o sistema de filtração de água correto ajuda a desenvolver células saudáveis para experimentos de cultura de células consistentes e reproduzíveis.
Equipamentos para tornar a preparação de meio de cultura celular e tampão muito confiável e livre de contaminação
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Esteja você trabalhando com linhas aderentes ou em suspensão, as células em cultura precisam ser passadas ou subcultivadas regularmente. Infelizmente, a passagem apresenta um desafio de contaminação porque o frasco de cultura é aberto, as células são manipuladas e novos meios e componentes são adicionados. Todas essas etapas permitem a introdução de contaminantes.
Seguir a técnica asséptica adequada, trabalhar rapidamente e usar as melhores ferramentas e reagentes não contaminados ajudará a reduzir a chance de introdução de contaminantes em suas culturas de células. Em particular, é essencial usar uma técnica de pipetagem asséptica adequada, com pipetas de filtro estéreis e pontas de pipeta que permitem que você trabalhe com rapidez e eficiência.
Ferramentas que facilitam a técnica asséptica
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Pare a contaminação antes que interrompa seu experimento. Um dos maiores desafios da cultura de células é o risco de contaminação. A contaminação vem em muitas formas: bactérias, fermento, mofo, produtos químicos, outros agentes biológicos, contaminação cruzada de linha celular ou uma combinação dos anteriores. A contaminação pode afetar o crescimento, morfologia e comportamento de suas células e, em última análise, comprometer seus resultados experimentais e / ou retardar seu projeto.
Filtre as células completamente: evite a introdução de contaminantes e melhore a eficiência
Você pode filtrar células assepticamente sem nunca precisar abrir um frasco ou entrar em um ambiente regulado, com nosso sistema inovador de expansão de células. Para evitar a contaminação durante as passagens fora do gabinete de biossegurança, este sistema combina tubulação para transferência asséptica de fluido e um cartucho de filtro para troca de gás na tampa pré-montada em frascos de plástico de agitação Erlenmeyer.
Você observará taxas de crescimento equivalentes entre nosso sistema MYCAP CCX e os frascos Erlenmeyer tradicionais. Preenchimento de meio de cultura, inoculação, amostragem e transferência de frascos podem ser feitos assepticamente fora do gabinete de biossegurança usando soldadores de tubo ou conectores assépticos.
Elimine a necessidade de frascos de backup e passagens redundantes
Os recursos do sistema MYCAP CCX permitem que você elimine quase completamente os riscos de contaminação durante a passagem, o que significa resultados mais consistentes e maior eficiência, independentemente da escala de seus experimentos. Elimine a necessidade de um gabinete de biossegurança durante a passagem do filtrado, reduzindo assim seus custos experimentais e simplificando suas operações.
Ferramentas que impedem a contaminação bacteriana e por micoplasma
Contaminação bacteriana
As bactérias são os contaminantes mais comuns. A contaminação bacteriana é geralmente visualmente evidente: a cultura torna-se turva ou turva e / ou a cor do meio muda, indicando uma queda no pH. A maioria das bactérias também são visíveis ao microscópio.
Uma vez observada a contaminação bacteriana, a cultura deve ser substituída e a descontaminação iniciada, um processo caro e demorado.
Para evitar contaminação bacteriana:
- Seja diligente com sua técnica
- Use apenas reagentes estéreis
- Cuidado com os estoques gerais de laboratório
- Use filtração estéril
- Use água ultrapura fresca para suas ações
Contaminação por micoplasma
Os micoplasmas são pequenos (0,15 µm-0,3 µm), sem parede celular e com membrana flexível. Essas características tornam a contaminação por micoplasma difícil de detectar ao microscópio. Seu pequeno tamanho permite que eles proliferem em altas concentrações, sem qualquer mudança óbvia na aparência da cultura.
A eliminação da contaminação por micoplasma de uma cultura é quase impossível. Eles são resistentes à maioria dos antibióticos e podem sobreviver ao nitrogênio líquido sem criopreservação, o que os permite contaminar outras células armazenadas no mesmo recipiente de nitrogênio líquido.
Usar um teste específico para micoplsma em suas culturas de células permite que você saiba imediatamente se suas células estão contaminadas, evitando perda de tempo, reagentes e esforço.
Para evitar a contaminação por micoplasma de suas linhas celulares:
- Teste culturas rotineiramente
- Colocar em quarentena e testar novas culturas de fontes externas
- Descartar culturas positivas para micoplasma
