Caracterización de líneas celulares

Como desarrollador de fármacos, el primer desafío regulatorio de fabricación al que se enfrenta es la generación de un banco de células maestras y de trabajo. La producción debe llevarse a cabo bajo las Buenas Prácticas de Fabricación y requiere conocimientos especializados tanto para la fabricación en sí como para las extensas pruebas de bioseguridad y caracterización necesarias para liberar los bancos.

Sartorius ofrece una amplia gama de servicios para caracterizar sus bancos de células de mamíferos de acuerdo con las directrices reguladoras de ICH (ICH Topic Q 5 D Quality of Biotechnology Products: Derivación y caracterización de sustratos celulares utilizados para la producción de productos biotecnológicos / biológicos). Nuestros servicios cumplen con los estándares farmacopeicos globales y se realizan en instalaciones acreditadas por la FDA de los EE. UU., Así como por la EMA y la MHRA.

Los planes de control de calidad listos para usar respaldan las pruebas y la liberación de bancos de células para su uso en programas de fabricación:

  • Research Cell Bank (RCB)
  • Master Cell Bank (MCB)
  • Banco de células de trabajo (WCB)
  • Banco de células de fin de producción (EoPCB)
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Servicios integrados de bioseguridad y caracterización de cGMP

Sartorius tiene una amplia experiencia en la caracterización de bancos de células utilizados en la producción de fármacos biológicos para terapias basadas en proteínas y virus. Los planes de pruebas de control de calidad de Sartorius cumplen con los requisitos para la liberación de bancos de células de mamíferos y están diseñados para cumplir con las regulaciones ICH Q5A con ensayos validados según los estándares GMP. Los esquemas de prueba listos para usar pueden agregarse a las estrategias de riesgo de desarrollo de medicamentos existentes o personalizarse para las necesidades de programas específicos.

Paquetes de caracterización y pruebas de bioseguridad para bancos de células

Requisitos de prueba del banco celular

Con un perfil de seguridad establecido durante más de 20 años, las células CHO son, con mucho, las líneas celulares de producción más utilizadas en la industria farmacéutica. Sartorius ha realizado pruebas de bioseguridad y caracterización en más de 200 bancos de células CHO. Nuestros científicos tienen una gran experiencia para asesorar sobre la estrategia de prueba más adecuada y rentable para cumplir con los requisitos reglamentarios. Esta recomendación toma en consideración tanto el historial de la línea celular como las materias primas utilizadas durante la fabricación del banco. A continuación se muestra un plan de prueba de control de calidad estándar para la caracterización de la línea celular CHO. Si bien este plan puede modificarse para células de origen humano y simio, se aplican los principios básicos.

Consulte a nuestros expertos


Prueba

MCB

WCB

EoPC

Identidad

 

 

 

Micoplasma

 

 

 

Esterilidad

 

 

 

Ensayos in vitro

 

 

 

Ensayos in vivo

 

 

 

Pruebas de anticuerpos

 

 

 

Infecciosidad por retrovirus

 

 

 

La transcriptasa inversa

 

 

 

Microscopio de electrones

 

 

 

Pruebas específicas de especies

 

 

 

Tabla 1: Descripción general de los requisitos de prueba de GMP, GLP

El proceso de banco de células comienza con la introducción de un banco de células de investigación (RCB) en la fabricación de un banco de células maestro (MBC).

Para que esto suceda, el RCB debe estar certificado como mínimo para ser estéril, libre de micoplasmas y de identidad asegurada. Además, el fabricante puede solicitar que se realice una prueba in vitro basada en células de amplio espectro para detectar posibles contaminantes virales.

Para acelerar la liberación de RCB, las opciones incluyen pruebas rápidas mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), estrategias de lectura intermedia in vitro y pruebas de identidad mediante códigos de barras de ADN.

Nuestro equipo tiene una amplia experiencia en la caracterización de bancos de células y proporciona un conjunto completo de ensayos para pruebas de MCB. Podemos consultar sobre los requisitos de prueba específicos de una línea celular o bancos de células.

Las pruebas de bioseguridad del banco de células maestras abarcan una variedad de actividades, incluidas las pruebas de identidad y la evaluación de la estabilidad genética. Además, se deben realizar varios ensayos diseñados para detectar la presencia de contaminantes potenciales.

Se utiliza una variedad de pruebas en la detección de agentes contaminantes, incluidas aquellas para detectar microorganismos (esterilidad, micoplasma y micobacterias), así como ensayos in vivo, in vitro, ensayos de infectividad de retrovirus y microscopía electrónica de transmisión. Estos pueden usarse para detectar virus adventicios y endógenos.

También se requiere una serie de pruebas de virus específicas de especie para las diferentes líneas celulares de producción (bovino, porcino, insecto, ratón, hámster, humano o primate). Para evaluar y determinar la estabilidad genética del banco de células, se pueden aplicar varias técnicas diferentes. Estos pueden incluir transferencia de Southern, secuenciación de ARNm o número de copias del transgén. La identidad se determina mediante códigos de barras de ADN.

La metodología de prueba utilizada para caracterizar los bancos de células maestras que se originan en diferentes especies incluye:

  • Prueba de esterilidad
  • Prueba de micoplasma
  • ensayos in vivo
  • ensayos in vitro
  • Ensayos de retrovirus
  • Ensayos bovinos y porcinos
  • Microscopio de electrones
  • Ensayos específicos de especies

Los ensayos de estabilidad genética proporcionados por Sartorius incluyen los siguientes:

  • Secuenciación de ácidos nucleicos
  • Southern Blot
  • Prueba de identidad
  • Número de copia genética

Póngase en contacto con los científicos de bioseguridad de Sartorius para discutir los requisitos de caracterización de MCB.

Los bancos de células de trabajo (WCB) se preparan a partir del MCB. Los requisitos de prueba de bioseguridad de la WCB dependen del nivel de prueba que se haya realizado en la MCB.

Donde ya se ha completado una caracterización extensa en el MCB, se requieren pruebas mínimas en el WCB. Dependiendo de la autoridad reguladora, esto generalmente se limita a la evaluación de identidad, estabilidad y contaminación por microbios. Las pruebas de virus solo se recomiendan cuando ocurre un riesgo reconocido.

Para caracterizar la estabilidad genética, el transgén se evalúa usando técnicas tales como transferencia Southern, secuenciación de ARNm y / o número de copias del transgén. La identidad se puede medir utilizando códigos de barras de ADN. La presencia de microbios se determina mediante ensayos de esterilidad, micoplasmas y micobacterias.

Las metodologías de prueba utilizadas para caracterizar los bancos de células de trabajo que se originan en diferentes especies incluyen:

  • Prueba de esterilidad
  • Prueba de micoplasma
  • ensayos in vitro

Se pueden solicitar ensayos de estabilidad genética utilizando estos métodos:

  • Secuenciación de ácidos nucleicos
  • Southern Blot
  • Prueba de identidad
  • Número de copia genética

Un banco de células de fin de producción (EoPCB) a veces se denomina banco de células de posproducción (PPCB) o células en el límite del cultivo in vitro. Estas células se prueban para validar el sistema de producción. Esto asegura que las celdas sean estables y que no haya problemas de contaminación dentro del sistema.

El momento del muestreo para una EoPCB variará entre productos y se realizará caso por caso.

Para las líneas celulares utilizadas en la fabricación de terapias basadas en proteínas, los requisitos de prueba son dobles; incluyen pruebas de estabilidad y pruebas de contaminación (Bioseguridad). Los esquemas de prueba para líneas celulares utilizadas en vacunas virales o vectores virales pueden no requerir las mismas evaluaciones de estabilidad genética dependiendo del proceso de generación de MCB.

Los requisitos para el EoPBC son muy similares a los del Master Cell Bank. El EoPCB requiere pruebas de estabilidad genética y comparación directa con el MCB. Las pruebas utilizadas incluyen el análisis genético del transgén usando técnicas tales como transferencia Southern, secuenciación de ARNm o número de copias del transgén. Se utilizan varios métodos diferentes para analizar posibles contaminantes, incluidos los microbios (esterilidad y micoplasma), virus adventicios (in vitro e in vivo, microscopía electrónica de transmisión) y pruebas de virus específicos, según lo determinado por el proceso.

La metodología de prueba utilizada para caracterizar EoPBC procedente de diferentes especies incluye:

  • Prueba de esterilidad
  • Prueba de micoplasma
  • Pruebas in vivo
  • Pruebas in vitro
  • Prueba de retrovirus
  • Ensayos bovinos y porcinos
  • Microscopio de electrones
  • Ensayos específicos de especies

Los ensayos de estabilidad genética proporcionados por Sartorius incluyen los siguientes:

  • Secuenciación de ácidos nucleicos
  • Southern Blot
  • Prueba de identidad
  • Número de copia genética

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