Preparação: Passagem Celular, Expansão e Contaminação de Cultura
A preparação da cultura de células engloba as técnicas fundamentais necessárias para garantir a confiança nos resultados experimentais. A qualidade de suas culturas de células se traduz diretamente na reprodutibilidade de seus experimentos. Algumas considerações fundamentais de preparação incluem:
- Prevenção de contaminação - não importa a escala de sua cultura
- Técnica estéril para a preparação de meios e reagentes e para a passagem estéril de células
- Técnicas e soluções eficazes para congelamento e descongelamento de linhas celulares
Para percepções biológicas em que você pode confiar, oferecemos ferramentas de cultura de células que permitem definir o cenário para dados experimentais confiáveis, melhorar sua produtividade e / ou garantir que você está escolhendo as soluções certas.
Compre ou produza seu próprio meio de cultura
O meio de cultura de células que você escolher é um dos aspectos mais importantes do seu projeto experimental. Sua escolha deve depender do tipo de células a serem cultivadas e da finalidade da cultura. Diferentes linhas celulares e tipos de células têm requisitos de crescimento altamente específicos, e uma série de formulações de meio de cultura estão disponíveis para atender aos requisitos de crescimento das células que você escolheu. Você pode comprar meio de cultura celular pronto ou prepará-lo a partir de um formulário eletrônico em seu laboratório. No último caso, a água é o principal componente do meio de cultura, tampões e aditivos que você usa com suas células, e a qualidade da água desempenha um papel vital em qualquer experimento de cultura de células.
Use água de alta qualidade livre de contaminantes para garantir que suas células estejam saudáveis e se comportem de maneira consistente de um experimento para o outro.
A contaminação por produtos químicos ou outros agentes biológicos indetectáveis a olho nu, como endotoxinas, íons inorgânicos e compostos orgânicos, pode afetar o crescimento, a morfologia e o comportamento das células. A água da rede típica contém 1-10 IU / mL de contaminação por endotoxina, mas os padrões internacionais <link> ditam <0,1 IU / mL de contaminação por endotoxina na água de cultura de células. Isso significa que seu sistema de purificação de água precisa eliminar essa endotoxina da água que você usa para a cultura de células. Usar o sistema de filtração de água correto ajuda a desenvolver células saudáveis para experimentos de cultura de células consistentes e reproduzíveis.
NOTA DE APLICAÇÃO
Água é Vida: Água Ultrapura no Cultivo de Células
A água é o principal componente de todos os meios de cultura de células e, portanto, é necessária para preparar meios, tampões e aditivos, bem como para servir a muitas funções auxiliares, como aquecimento, resfriamento, limpeza e enxágue. Aprenda como a água ultrapura melhora o resultado de seus experimentos de cultura de células nesta nota de aplicação.
NOTA DE APLICAÇÃO
Prevenção da morte celular: sistema de água ultrapura reduz o teor de endotoxinas abaixo dos limites prescritos
A presença de endotoxinas pode levar à morte celular em culturas de células de mamíferos. Por esse motivo, meios ultrapuros, ou seja, água ultrapura, com níveis comprovadamente abaixo dos limites, devem ser usados para fabricar biofármacos ou para propagar linhagens ou culturas de células. Leia nossa nota de aplicação para saber como o sistema de água ultrapura Arium® pro VF fornece água da mais alta qualidade sob demanda que excede seus requisitos para água livre de endotoxinas.
Ferramentas para tornar sua preparação do meio de cultura e tampão confiável e livre de contaminação:
Células de passagem
Esteja você trabalhando com linhas aderentes ou em suspensão, as células em cultura precisam ser passadas ou subcultivadas regularmente. Infelizmente, a passagem apresenta um desafio de contaminação porque o frasco de cultura é aberto, as células são manipuladas e novos meios e componentes são adicionados. Todas essas etapas permitem a chance de introdução de contaminantes. Seguir a técnica asséptica adequada, trabalhar rapidamente e usar as melhores ferramentas e reagentes não contaminados ajudará a reduzir a chance de introdução de contaminantes em suas culturas de células. Em particular, é essencial usar uma técnica de pipetagem asséptica adequada, com pipetas de filtro estéreis e pontas de pipeta que permitem que você trabalhe com rapidez e eficiência.
POSTER
Dez principais dicas para evitar contaminação na pipetagem
Você sabe como evitar a contaminação na pipetagem? É fácil! Baixe este pôster e obtenha 10 dicas para evitar contaminação.
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Ferramentas que facilitam a técnica asséptica:
Filtre as células completamente: evite a introdução de contaminantes e melhore a eficiência
Você pode filtrar células assepticamente sem nunca precisar abrir um frasco ou entrar em um ambiente regulado, com nosso sistema inovador de expansão de células. Para evitar a contaminação durante as passagens fora do gabinete de biossegurança, este sistema combina tubulação para transferência asséptica de fluido e um cartucho de filtro para troca de gás na tampa pré-montada em frascos de plástico de agitação Erlenmeyer.
Você observará taxas de crescimento equivalentes entre nosso sistema MYCAP CCX e os frascos Erlenmeyer tradicionais. Preenchimento de meio de cultura, inoculação, amostragem e transferência de frascos podem ser feitos assepticamente fora do gabinete de biossegurança usando soldadores de tubo ou conectores assépticos.
Elimine a necessidade de frascos de backup e passagens redundantes
Os recursos do sistema MYCAP CCX permitem que você elimine quase completamente os riscos de contaminação durante a passagem, o que significa resultados mais consistentes e maior eficiência, independentemente da escala de seus experimentos. Elimine a necessidade de um gabinete de biossegurança durante a passagem do filtrado, reduzindo assim seus custos experimentais e simplificando suas operações.
GUIAS DE SELEÇÃO
Pipeta Essentials - Faça sua escolha e como selecionar uma pipeta mecânica
Sua escolha de pipeta e ponta de pipeta pode fazer a diferença ao pipetar células da semente e estoques de trabalho de suas linhas celulares estabelecidas. Baixe nossa lista de verificação de Pipeta Essentials e como selecionar um guia de pipeta mecânica ao determinar a pipeta certa para suas necessidades de laboratório.
Ferramentas para manter suas células vivas durante a criopreservação:
Pare a contaminação antes que interrompa seu experimento
Um dos maiores desafios da cultura de células é o risco de contaminação. A contaminação vem em muitas formas: bactérias, fermento, mofo, produtos químicos, outros agentes biológicos, contaminação cruzada de linha celular ou uma combinação dos anteriores. A contaminação pode afetar o crescimento, morfologia e comportamento de suas células e, em última análise, comprometer seus resultados experimentais e / ou retardar seu projeto.
Contaminação bacteriana
As bactérias são os contaminantes mais comuns. A água da torneira típica contém 100-1.000 CFU / 100 mL de contaminação bacteriana, mas o padrão definido pela ASTM International para água usada em culturas de células é <10 CFU / 100 mL. A contaminação bacteriana é geralmente facilmente detectável porque a cultura se tornará turva ou turva e / ou a cor do meio de cultura mudará, indicando uma queda no pH. A maioria das bactérias também são visíveis ao microscópio.
Apesar da facilidade de detectar a maioria das contaminações bacterianas, ele ainda pode representar uma ameaça, já que você pode não perceber até que seja hora de seu ensaio. Nesse caso, você precisará substituir a cultura e iniciar a descontaminação, o que pode ser caro e demorado.
Para evitar contaminação bacteriana:
- Seja diligente com sua técnica estéril e use apenas reagentes estéreis
- Cuidado com os estoques gerais de laboratório, pois monitorar a contaminação neles pode ser um desafio
- Cuide de seus reagentes e use filtração estéril
- Certifique-se de usar água ultrapura recém-produzida para seus estoques; A água também é um reagente crítico
Ferramentas que impedem a contaminação bacteriana:
Contaminação por micoplasma
A contaminação por Mycoplasma é astuta. Essas bactérias pequenas (0,15 µm-0,3 µm) não têm parede celular e têm uma membrana flexível. Isso torna o micoplasma difícil de detectar usando microscópios, e seu pequeno tamanho permite que eles proliferem em alta concentração dentro da cultura de células de mamíferos sem qualquer turvação perceptível ou outra mudança na aparência da cultura de células.
A contaminação de sua cultura pode não ser aparente até que suas células sejam perdidas.
A contaminação cruzada de outras células contaminadas é uma das principais fontes de contaminação por micoplasma. A eliminação da contaminação por micoplasma de uma cultura é quase impossível; é resistente à maioria dos antibióticos e pode sobreviver ao nitrogênio líquido sem técnicas de criopreservação, contaminando outras células armazenadas no mesmo recipiente de nitrogênio líquido.
A melhor maneira de prevenir a contaminação por micoplasma em grande escala de suas linhas celulares:
- Teste rotineiramente suas culturas e descarte todas as culturas positivas para micoplasma
Colocar em quarentena e testar novas culturas de fontes externas
NOTA DE APLICAÇÃO
Comparação do Kit Microsart® AMP Mycoplasma com produtos de dois outros fornecedores
Entre as menores bactérias do mundo, os micoplasmas são capazes de reprodução independente e, portanto, a contaminação das culturas de células continua sendo um grande problema. Um teste de rotina sensível para contaminação de culturas de células é essencial. Com vários kits de PCR diferentes disponíveis para detectar micoplasma, comparamos o kit Microsart® AMP Mycoplasma com produtos de dois outros fornecedores.
