Experiência: Biologia Celular e Purificação de Proteínas
No dia em que está realizando os experimentos que planejou, você precisa que todas as suas ferramentas funcionem de forma confiável. Esteja você realizando experimentos de curso de tempo, analisando a expressão de proteínas ou fazendo qualquer outro experimento com sua cultura de células, todas as suas ferramentas devem funcionar impecavelmente para fornecer dados nos quais você pode confiar.
Para ajudá-lo a traduzir ideias em percepções, oferecemos um portfólio de ferramentas e tecnologias de cultura de células que ajudam a realizar experimentos e adquirir dados nos quais você pode confiar.
Leia mais sobre esses tópicos abaixo:
- Protein purification and dialysis
- Working with secreted proteins
- Application Note: From Mammalian Cell Cultures to Pure Proteins: Sartoclear Dynamics® Lab Significantly Reduces Cell Harvest Time
- Application Note: Lab-Scale Clarification of Mammalian Suspension Cultures Using Sartoclear Dynamics® Lab V Kits
- Gain cellular insights quickly
- Cellular proliferation
- Cellular apoptosis
- Cellular cytotoxicity
Purificação de proteínas e diálise
Se o propósito de sua cultura de células é a purificação de proteínas, uma grande parte do seu dia é gasta filtrando, purificando e concentrando suas proteínas. Essas etapas são desafiadoras porque a proteína pode ser degradada, precipitada ou perdida em qualquer etapa durante um protocolo de purificação de vários dias. Selecionar as ferramentas certas pode melhorar a eficiência e diminuir a chance de você perder sua proteína pura e concentrada.
Cada etapa do seu protocolo pode reduzir o seu rendimento de proteína:
- Degradação de proteínas durante a lise celular. Como pode levar horas para lisar as células e clarificar o sobrenadante, sua proteína é exposta a proteases e pode ser truncada ou completamente degradada.
- Secando durante a concentração. Após uma etapa de purificação bem-sucedida, a concentração pode parecer trivial. Mas na ausência de precauções embutidas, você pode perder sua proteína no concentrador de proteína girando sua amostra muito rápido ou por muito tempo.
- Vazamento durante a diálise. Durante a longa diálise de várias etapas, sua proteína pode vazar da bolsa ou cassete de diálise. Mesmo se o cassete estiver totalmente intacto, sua proteína pode se desdobrar, redobrar, agregar ou sofrer proteólise, especialmente em um protocolo de vários dias. É especialmente frustrante perder proteína neste estágio final.
Soluções para manter sua proteína intacta e sua purificação rápida:
Nota de aplicação
Produtos de ultrafiltração da Sartorius na preparação de nanocarreadores biológicos e médicos - uma breve revisão
Esta breve revisão fornece exemplos da literatura recente que trata da preparação de nanopartículas. Um foco particular é colocado nas etapas de concentração e purificação que foram realizadas por meio de ultrafiltração com dispositivos Sartorius Vivaspin® ou Vivaflow® com diferentes tamanhos de poros (MWCO).
Trabalho com proteínas secretadas
Trabalhar com proteínas secretadas permite evitar o processo de lise complicado. Além disso, sua proteína nunca encontra proteases intracelulares durante a purificação. Independentemente de saber se sua proteína é secretada naturalmente ou se você otimizou sua proteína intracelular para permitir a purificação em HEK Freestyle ou outra linha celular otimizada, com uma proteína secretada, você encontra um conjunto diferente de desafios. Por exemplo, as células intactas devem ser separadas de um volume relativamente grande de sobrenadante e a amostra de proteína deve ser concentrada.
Ferramentas para isolar, dialisar e concentrar sua proteína secretada:
Nota de aplicação
De culturas de células de mamíferos a proteínas puras: Sartoclear Dynamics® Lab reduz significativamente o tempo de colheita de células
vNeste estudo, o novo kit Sartoclear Dynamics® Lab V foi avaliado para a remoção de células MEXi-293E (HEK293) de mamífero que expressam transitoriamente IgG de culturas de células. O método foi comparado diretamente com o método padrão atual que requer duas etapas de centrifugação.
Nota de aplicação
Clarificação em escala de laboratório de culturas de suspensão de mamíferos usando kits Sartoclear Dynamics® Lab V
Este estudo avalia um novo método para a clarificação em escala piloto ou de laboratório de sobrenadantes de cultura de células de mamíferos. A etapa de filtração é conduzida antes da purificação de anticorpos monoclonais com cromatografia de afinidade de proteína A. Em um processo de clarificação convencional, as células são removidas por uma etapa de centrifugação demorada seguida por filtração. Mostramos que o kit Sartoclear Dynamics® Lab V não é apenas um método significativo de economia de tempo em comparação com o processo de clarificação convencional. Ele também produz uma taxa de depuração melhorada que observamos em combinação com uma filtragem de alta taxa de fluxo. Para clarificação de culturas de células de grande volume, os kits Sartoclear Dynamics® Lab V são uma adição atraente à instrumentação de laboratório padrão para aumentar a produtividade e o rendimento antes da purificação de proteínas.
Obtenha informações sobre celulares com precisão e rapidez
Se seu objetivo é fornecer informações fisiologicamente relevantes sobre suas células com variabilidade reduzida, você precisa das ferramentas de imagem e análise certas. As melhores ferramentas fornecem análises reproduzíveis e ricas em informações para ajudá-lo a obter rapidamente percepções e publicar seus resultados de maneira econômica ou avançar com ensaios adicionais.
Proliferação Celular
A proliferação é um mecanismo essencial para o desenvolvimento, regeneração e renovação normais do tecido. Três tipos principais de ensaios de proliferação de células bioquímicas, baseados na síntese de DNA, atividade metabólica e concentração de ATP, são tipicamente ensaios de ponto final único unidos para fornecer dados de curso de tempo. Essas medições de ponto final são indiretas e sujeitas a artefatos que não podem ser verificados prontamente por mudanças morfológicas.
A imagem de células vivas permite a medição contínua de ensaios de proliferação celular dentro de sua incubadora, como medições de confluência sem rótulo e contagem direta de células usando rotulagem fluorescente.
Apoptose Celular
A apoptose é um processo essencial para o desenvolvimento normal do tecido e homeostase, no qual as células sofrem morte celular programada em tempo hábil. Os ensaios comuns para apoptose incluem ensaios enzimáticos para medir a ativação da caspase-3/7 ou externalização de PS usando leitores de placas ou citômetros de fluxo. Esses ensaios comuns produzem uma única medição de ponto final definida pelo usuário, exigem várias etapas de lavagem ou levantamento de células que podem resultar em artefatos e não são passíveis de medições de longo prazo devido ao aumento do sinal de fundo ao longo do tempo.
A análise de células vivas permite a medição de múltiplas vias apoptóticas simultaneamente e em tempo real usando reagentes especializados. Os sinais apoptóticos podem então ser correlacionados com imagens de contraste de fase para fornecer uma visão biológica adicional e validação morfológica da morte celular apoptótica.
Citotoxicidade celular
Citotoxicidade é um termo geral que descreve os efeitos prejudiciais de substâncias ou mudanças ambientais na saúde celular que podem comprometer a atividade metabólica, inibir o crescimento ou divisão celular ou, por fim, produzir a morte celular.
Vários ensaios de citotoxicidade envolvem a medição da integridade da membrana celular, seja com corantes aos quais as células saudáveis são impermeáveis ou por meio da liberação de marcadores de células mortas. As medições da atividade metabólica também são usadas para medir a citotoxicidade celular. No entanto, poucos desses ensaios envolvem a contagem direta de células mortas ao longo do tempo.
A análise de células vivas permite a medição de vias citotóxicas com base na integridade da membrana celular em tempo real, usando reagentes especializados. Os núcleos das células que morrem absorvem um corante inerte excluído das células vivas, e as células que morrem são identificadas ao longo do tempo por um aumento no sinal fluorescente. Os sinais citotóxicos podem então ser correlacionados com imagens de contraste de fase para fornecer validação morfológica adicional de morte celular.
Nota de aplicação
Ensaio de controle de qualidade de cultura celular
Leia nossa nota de aplicação: Ensaio de controle de qualidade de cultura celular para saber como você pode usar o Incucyte para documentar e monitorar a cultura celular de rotina e melhorar a qualidade e a consistência do ensaio baseado em células.
