Preparación: expansión celular y control de la contaminación para el descubrimiento de fármacos
La eficiencia y consistencia de su programa de descubrimiento de fármacos comienza con los fundamentos de la preparación de cultivos celulares. Una de las técnicas centrales implica la prevención de la contaminación en cultivos celulares a gran escala, incluido el paso de células a escala. Las soluciones innovadoras para el pasaje le permiten eliminar prácticamente los riesgos de contaminación, agilizar los procesos y mejorar su eficiencia.
Para acelerar su programa de descubrimiento de medicamentos, ofrecemos una cartera que lo ayuda a mejorar la productividad, garantizar que está eligiendo a los candidatos adecuados y reducir su tiempo para realizar ensayos clínicos.
Lea más sobre estos temas a continuación:
Detenga la contaminación antes de que detenga su programa de descubrimiento de fármacos
La contaminación puede tomar la forma de bacterias, levaduras, moho, productos químicos, otros agentes biológicos y / o contaminación cruzada de líneas celulares. Puede afectar el crecimiento, la morfología y el comportamiento de sus células cultivadas y ralentizar su proyecto. La contaminación es uno de los mayores desafíos en cualquier programa que involucre cultivo celular.
Contaminación bacteriana
Las bacterias son los contaminantes más comunes. El agua corriente típica contiene 100-1.000 UFC / 100 ml de contaminación bacteriana, pero el estándar establecido por ASTM International es <10 UFC / 100 ml para la contaminación bacteriana en el trabajo de cultivo celular. La contaminación bacteriana, a diferencia de otros contaminantes, suele ser fácilmente detectable porque el cultivo se volverá turbio o turbio y / o cambiará el color del medio, lo que indica una caída del pH. Las bacterias también son fácilmente visibles bajo el microscopio.
A pesar de la facilidad para detectar la mayoría de la contaminación bacteriana, aún puede disminuir su eficiencia, ya que es posible que no la note de inmediato y confíe en este cultivo para un próximo ensayo. La descontaminación también puede resultar costosa y llevar mucho tiempo.
To avoid bacterial contamination:
- Water is your most important reagent, so be sure to use freshly produced ultrapure water for your stocks
- Take great care of your other reagents and use sterile filtration to eliminate any chance of contamination
- Be diligent with your sterile technique and use only sterile reagents
- Beware of general lab stocks as monitoring contamination in those tends to be a challenge
NOTA DE APLICACIÓN
El agua es vida: agua ultrapura en el cultivo celular
El agua es un componente importante de todos los medios de cultivo celular y, por lo tanto, es necesaria para preparar medios, tampones y aditivos, y para cumplir muchas funciones auxiliares, como calentar, enfriar, limpiar y enjuagar. Aprenda cómo el agua ultrapura mejora el resultado de sus experimentos de cultivo celular en esta nota de aplicación.
NOTA DE APLICACIÓN
Prevención de la muerte celular: el sistema de agua ultrapura reduce el contenido de endotoxinas por debajo de los límites prescritos
La presencia de endotoxinas puede provocar la muerte celular en cultivos de células de mamíferos. Por esta razón, los medios ultrapuros, es decir, agua ultrapura, con niveles probados por debajo de los límites, deben usarse para fabricar productos biofarmacéuticos o para propagar líneas celulares o cultivos celulares. Lea nuestra nota de aplicación para conocer cómo el sistema de agua ultrapura Arium® pro VF proporciona agua a pedido de la más alta calidad que supera sus requisitos de agua sin endotoxinas.
Herramientas para ayudarlo a evitar la contaminación bacteriana:
Contaminación por micoplasma
La contaminación por micoplasmas es astuta porque los micoplasmas son pequeños (0,15 µm-0,3 µm), no tienen pared celular y tienen una membrana flexible. Estas membranas flexibles y la falta de pared celular hacen que el micoplasma sea difícil de detectar usando un microscopio, y su pequeño tamaño les permite proliferar a altas concentraciones dentro del cultivo de células de mamíferos sin ninguna turbidez perceptible u otro cambio en la apariencia del cultivo celular.
Es posible que la contaminación de su cultivo por micoplasma no sea evidente hasta que se pierda su línea celular.
La contaminación cruzada de otras células contaminadas es una de las principales fuentes de contaminación por micoplasma. La eliminación de la contaminación por micoplasmas de un cultivo es casi imposible; es resistente a la mayoría de los antibióticos y puede sobrevivir al nitrógeno líquido sin técnicas de criopreservación, contaminando otras células almacenadas en el mismo depósito de nitrógeno líquido.
El uso de una prueba específica de micoplasma en sus cultivos celulares aumenta su eficiencia; le permite saber inmediatamente si sus células están contaminadas, evitando la pérdida de tiempo, reactivos y esfuerzo. Trabajar con cultivos libres de micoplasmas aumenta la probabilidad de que los resultados que ve en el banco se trasladen a la clínica.
Paso de células
Todos los cultivos celulares eventualmente necesitan ser pasados o subcultivados durante la expansión celular, sin importar si son células adherentes o no adherentes. Desafortunadamente, el paso presenta un desafío de contaminación porque se abre el matraz de cultivo, se manipulan las células y se agregan nuevos medios y componentes. Todos estos pasos aumentan la posibilidad de introducir contaminantes. Seguir una técnica aséptica adecuada, trabajar rápidamente y utilizar las mejores herramientas y reactivos no contaminados ayudará a reducir la introducción de contaminantes en sus cultivos celulares.
Herramientas para reducir los contaminantes en sus cultivos:
Células de paso completamente fuera de la cubierta: evite la introducción de contaminantes y mejore la eficiencia
Puede pasar las células de forma aséptica sin necesidad de abrir un matraz o entrar en una campana, con nuestro innovador sistema de expansión de células. Para evitar la contaminación durante los pasos fuera de la cubierta de bioseguridad, este sistema combina un tubo para la transferencia aséptica de fluidos y un cartucho de filtro para el intercambio de gases en la tapa premontada en matraces de agitación de plástico Erlenmeyer.
Observará tasas de crecimiento equivalentes entre nuestro sistema MYCAP CCX y los matraces Erlenmeyer tradicionales. El llenado de medios, la inoculación, el muestreo y la transferencia desde los matraces se pueden realizar de forma aséptica fuera de la cabina de bioseguridad mediante el uso de soldadores de tubos o conectores asépticos.
Elimina la necesidad de matraces de respaldo y pasajes redundantes
Las características del sistema MYCAP CCX le permiten eliminar casi por completo los riesgos de contaminación durante el paso, lo que significa resultados más consistentes y una mayor eficiencia, independientemente de la escala de sus experimentos. Elimine la necesidad de un gabinete de bioseguridad durante el paso, lo que reduce sus costos experimentales y agiliza sus operaciones.
Mejore la eficiencia de su manejo de líquidos para minimizar los daños durante la criopreservación
Sus líneas celulares son uno de sus recursos más valiosos, pero desafortunadamente, también son frágiles. Las líneas celulares en cultivo continuo pueden perderse por senescencia, contaminación y / o deriva genética en la población. Protege sus líneas celulares mediante la criopreservación en nitrógeno líquido. Sin embargo, los procesos de congelación y descongelación son estresantes para estas frágiles células. Las células almacenadas en nitrógeno líquido suelen estar protegidas de los efectos dañinos mediante el uso de crioprotectores, como DMSO o glicerol. Trabajar con rapidez y utilizar una buena técnica también es fundamental para reducir la posibilidad de dañar estas invaluables células.
Las herramientas correctas lo ayudarán a trabajar de manera rápida y eficiente, mientras que las herramientas incorrectas pueden ralentizarlo e incluir la necesidad de pasos adicionales.
Su elección de pipeta y punta de pipeta puede marcar la diferencia al pipetear células de la semilla y de las existencias de trabajo de sus líneas celulares establecidas. Las soluciones que contienen crioprotectores tienen una tensión superficial más baja que los medios de cultivo celular acuosos. Por ejemplo, el crioprotector más utilizado, el DMSO, tiene una tensión superficial de aproximadamente 43 mN / ma 20 ° C (el agua es de 73 mN / m). Una tensión superficial baja significa que el líquido recubre la punta de la pipeta, lo que dificulta el pipeteo con precisión. El uso de la punta de pipeta correcta, como las puntas de baja retención con superficies pulidas y tratadas, puede ayudarlo a asegurar la proporción correcta de crioprotector a suspensión celular, disminuyendo así la posibilidad de daño celular por congelación y descongelación.
