Preparação: Expansão Celular e Controle de Contaminação para Descoberta de Drogas
A eficiência e a consistência de seu programa de descoberta de medicamentos começam com os fundamentos da preparação de cultura de células. Uma das técnicas principais envolve a prevenção da contaminação em culturas de células em grande escala, incluindo células de passagem em escala. Soluções inovadoras para passagem permitem que você elimine praticamente os riscos de contaminação, agilize processos e melhore sua eficiência.
Para acelerar seu programa de descoberta de medicamentos, oferecemos um portfólio que ajuda a aumentar a produtividade, garantir que você está escolhendo os candidatos certos e diminuir o tempo para o teste clínico.
Leia mais sobre esses tópicos abaixo:
- Stop Contamination Before it Stops Your Experiment
- Bacterial contamination
- Mycoplasma contamination
- Passaging cells
- Passage cells completely outside the hood: avoid introducing contaminants and improve efficiency
- Improve the efficiency of your liquid handling to minimize damage during cryopreservation
Pare a contaminação antes que interrompa seu programa de descoberta de drogas
A contaminação pode assumir a forma de bactérias, leveduras, fungos, produtos químicos, outros agentes biológicos e / ou contaminação cruzada de linha celular. Pode afetar o crescimento, a morfologia e o comportamento de suas células cultivadas e retardar seu projeto. A contaminação é um dos maiores desafios em qualquer programa que envolva cultura de células.
Contaminação bacteriana
As bactérias são os contaminantes mais comuns. A água da torneira típica contém 100-1.000 CFU / 100 mL de contaminação bacteriana, mas o padrão definido pela ASTM International é <10 CFU / 100 mL para contaminação bacteriana no processo de cultura de células. A contaminação bacteriana, ao contrário de alguns outros contaminantes, é geralmente facilmente detectável porque a cultura se tornará turva ou turva e / ou a cor do meio de cultura celular mudará, indicando uma queda no pH. As bactérias também são facilmente visíveis ao microscópio.
Apesar da facilidade de detectar a maioria das contaminações bacterianas, ele ainda pode diminuir sua eficiência, já que você pode não perceber imediatamente e pode contar com essa cultura para um próximo ensaio. A descontaminação também pode ser cara e demorada.
Para evitar contaminação bacteriana:
- A água é o seu reagente mais importante, então certifique-se de usar água ultrapura recém-produzida para seus estoques
- Tome muito cuidado com seus outros reagentes e use filtração estéril para eliminar qualquer chance de contaminação
- Seja diligente com sua técnica estéril e use apenas reagentes estéreis
- Cuidado com os estoques gerais de laboratório, pois monitorar a contaminação neles tende a ser um desafio
NOTA DE APLICAÇÃO
Água é Vida: Água Ultrapura no cultivo de células
A água é o principal componente de todos os meios de cultura de células e, portanto, é necessária para preparar meios, tampões e aditivos, e também para servir a muitas funções auxiliares, como aquecimento, resfriamento, limpeza e enxágue. Aprenda como a água ultrapura melhora o resultado de seus experimentos de cultura de células nesta nota de aplicação.
NOTA DE APLICAÇÃO
Prevenção da morte celular: sistema de água ultrapura reduz o conteúdo de endotoxinas abaixo dos limites prescritos
A presença de endotoxinas pode levar à morte celular em culturas de células de mamíferos. Por esse motivo, meios ultrapuros, ou seja, água ultrapura, com níveis comprovadamente abaixo dos limites, devem ser usados para fabricar biofármacos ou para propagar linhagens ou culturas de células. Leia nossa nota de aplicação para saber como o sistema de água ultrapura Arium® pro VF fornece água da mais alta qualidade sob demanda que excede seus requisitos para água livre de endotoxinas.
Ferramentas para ajudá-lo a evitar a contaminação bacteriana:
Contaminação por micoplasma
A contaminação por micoplasma é astuta porque os micoplasmas são pequenos (0,15 µm-0,3 µm), não possuem parede celular e possuem membrana flexível. Estas membranas flexíveis e a falta de uma parede celular tornam o micoplasma difícil de detectar usando um microscópio, e seu pequeno tamanho permite que eles proliferem em alta concentração dentro da cultura de células de mamíferos sem qualquer turbidez perceptível ou outra mudança na aparência da cultura de células.
A contaminação de sua cultura por micoplasma pode não ser aparente até que sua linha celular seja perdida.
A contaminação cruzada de outras células contaminadas é uma das principais fontes de contaminação por micoplasma. A eliminação da contaminação por micoplasma de uma cultura é quase impossível; é resistente à maioria dos antibióticos e pode sobreviver ao nitrogênio líquido sem técnicas de criopreservação, contaminando outras células armazenadas no mesmo depósito de nitrogênio líquido.
Usar um teste específico para micoplasma em suas culturas de células aumenta sua eficiência; ele permite que você saiba imediatamente se suas células estão contaminadas, evitando perda de tempo, reagentes e esforço. Trabalhar com culturas livres de micoplasma aumenta a probabilidade de que os resultados que você vê na bancada sejam traduzidos para a clínica.
Células de passagem
Todas as culturas de células eventualmente precisam ser passadas ou subcultivadas durante a expansão celular, independentemente de serem células aderentes ou não aderentes. Infelizmente, a passagem apresenta um desafio de contaminação porque o frasco de cultura é aberto, as células são manipuladas e novos meios e componentes são adicionados. Todas essas etapas aumentam a chance de introdução de contaminantes. Seguir a técnica asséptica adequada, trabalhar rapidamente e usar as melhores ferramentas e reagentes não contaminados ajudará a reduzir a introdução de contaminantes em suas culturas de células.
Ferramentas para reduzir contaminantes em suas culturas:
Filtre as células completamente: evite a introdução de contaminantes e melhore a eficiência
Você pode filtrar células assepticamente sem nunca precisar abrir um frasco ou entrar em um ambiente regulado, com nosso sistema inovador de expansão de células. Para evitar a contaminação durante as passagens fora do gabinete de biossegurança, este sistema combina tubulação para transferência asséptica de fluido e um cartucho de filtro para troca de gás na tampa pré-montada em frascos de plástico de agitação Erlenmeyer.
Você observará taxas de crescimento equivalentes entre nosso sistema MYCAP CCX e os frascos Erlenmeyer tradicionais. Preenchimento de meio de cultura, inoculação, amostragem e transferência de frascos podem ser feitos assepticamente fora do gabinete de biossegurança usando soldadores de tubo ou conectores assépticos.
Elimine a necessidade de frascos de backup e passagens redundantes
Os recursos do sistema MYCAP CCX permitem que você elimine quase completamente os riscos de contaminação durante a passagem, o que significa resultados mais consistentes e maior eficiência, independentemente da escala de seus experimentos. Elimine a necessidade de um gabinete de biossegurança durante a passagem do filtrado, reduzindo assim seus custos experimentais e simplificando suas operações.
Melhore a eficiência do manuseio de líquidos para minimizar os danos durante a criopreservação
Suas linhagens celulares são um de seus recursos mais valiosos, mas, infelizmente, também são frágeis. Linhas celulares cultivadas continuamente podem ser perdidas por senescência, contaminação e / ou deriva genética na população. Você protege suas linhas celulares por criopreservação em nitrogênio líquido. No entanto, os processos de congelamento e descongelamento são estressantes para essas células frágeis. As células armazenadas em nitrogênio líquido geralmente são protegidas dos efeitos prejudiciais por meio do uso de crioprotetores, como DMSO ou glicerol. Trabalhar rapidamente e usar uma boa técnica também é fundamental para reduzir a chance de danificar essas células valiosas.
As ferramentas corretas o ajudarão a trabalhar com rapidez e eficiência, enquanto as ferramentas erradas podem atrasá-lo e incluir a necessidade de etapas extras.
Sua escolha de pipeta e ponta de pipeta pode fazer a diferença ao pipetar células da semente e estoques de trabalho de suas linhas celulares estabelecidas. Soluções contendo crioprotetores têm tensão superficial mais baixa do que os meios de cultura de células aquosos. Por exemplo, o crioprotetor mais comumente usado, o DMSO, tem uma tensão superficial de cerca de 43 mN / ma 20◦C (a água é 73 mN / m). Baixa tensão superficial significa que o líquido reveste a ponta da pipeta, dificultando a pipetagem com precisão. Usar a ponta de pipeta certa, como pontas de baixa retenção com superfícies polidas e tratadas, pode ajudar a garantir a proporção correta de crioprotetor para suspensão celular, diminuindo assim a chance de danos celulares no congelamento e descongelamento.
