Princípios SPR Pioneer

Princípios SPR Pioneer

A tecnologia de ressonância plasmônica de superfície (SPR) pode ser usada para sondar a afinidade e a cinética entre uma variedade de moléculas de fragmentos de moléculas pequenas a partículas de vírus, sem a necessidade de marcadores para detecção. As interações de ligação são monitoradas em um biossensor que é composto por uma lâmina de vidro fina revestida de ouro.

Na maioria dos casos, uma matriz de dextrana é fixada ao revestimento de ouro, que atua como um substrato ao qual produtos químicos de imobilização específicos podem ser introduzidos para anexar um parceiro de ligação ao biossensor. O outro parceiro de ligação será introduzido no biossensor usando um sistema fluídico automatizado.

figura 1

Quando a luz passa pela superfície do biossensor e é refletida no revestimento de ouro, em um certo ângulo de incidência, uma parte da energia da luz se acopla através do revestimento de ouro e cria uma onda de plasmon de superfície na amostra e na interface da superfície de ouro .

O ângulo de luz incidente necessário para sustentar a onda de plasmon de superfície é sensível às mudanças do índice de refração que é proporcional às mudanças de massa na superfície (Figura 1).

Um ensaio de ligação SPR típico é mostrado na Figura 2. Conforme a massa se acumula na superfície do sensor durante uma interação de ligação, o índice de refração aumenta e um aumento no sinal de resposta é observado.

Depois que a amostra é substituída por tampão, a massa diminuirá na superfície devido à dissociação das moléculas e reduzirá a resposta da unidade de ressonância. Ao repetir este ciclo em diferentes concentrações, os cálculos podem ser feitos para ka (taxa de ativação) e kd (taxa de desativação) e afinidade de ligação da interação biomolecular (Figura 2).

Figura 2

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