ミクログリアの特性解析

• pH感受性の蛍光プローブを用いて、画像や動画でミクログリアのファゴサイトーシスを観察します。
• アポトーシス細胞、細胞破片、タンパク質凝集体、生体微粒子のファゴサイトーシスに適しています。

図1. ミクログリアによるファゴサイトーシスの可視化と検証 iPSC由来ミクログリア（Axol BioSciences）がpHrodo Orangeで標識したアポトーシスNeuro2A細胞を飲み込む様子をタイムラプスで可視化されています。アポトーシス標的細胞がミクログリアの細胞質内に侵入する様子を確認できます。Neuro2Aの標的細胞は、Incucyte pHrodo Orange Cell Labeling Kitでラベル化し、スタウロスポリンによってアポトーシスを誘導しました。

Incucyte^® pHrodo^® Orange試薬から得られる蛍光シグナルの自動セグメンテーション

Incucyte pHrodo Orange Cell Labeling Kitを用いたアポトーシスNeuro2A細胞やβアミロイド凝集体に対する貪食応答のリアルタイム解析

貪食モジュレーターの作用機序の評価

図2. ミクログリアによる貪食のリアルタイム定量化 iPSC由来ミクログリア（Axol Bioscience）が、pHrodoにより標識したアポトーシス神経細胞（Neuro-2A）を貪食している様子を示す代表的な蛍光画像です。標的細胞が酸性のファゴソームに取り込まれると、細胞内のオレンジ色の蛍光の増加が観察されました。セグメンテーションマスクは水色の輪郭で示されています。pHrodoにより標識されたNeuro2A細胞のエフェロサイトーシスは、細胞数依存します。pHrodo標識Aβ凝集体の貪食は、時間依存的および濃度依存的です。

図3．貪食調節機構の評価 BV-2エフェクター細胞は、アポトーシスを起こしたNeuro2A細胞（左側のパネル）、または大腸菌バイオ粒子（中央のパネル）を除去（エフェロサイトーシス）します。 シトカラシン D（上のパネル）は、エフェロサイトーシスとファゴサイトーシスの両方を濃度依存的に阻害し、IC50 値はそれぞれ 0.16 µM と 1.5 µM でした。 対照的に、aVb3およびaVb5インテグリンの阻害剤であるcilengitideは、テストした最高濃度（100 μM）において、ファゴサイトーシスにほとんど影響を与えない一方で、エフェロサイトーシスを選択的に減弱化しました（IC50値0.17 μM）。これらのデータは、細菌のファゴサイトーシスには関与せず、除去に必要な細胞間相互作用にインテグリンが関与していることを支持するものです。.

ミクログリアの走化性を画像と動画で観察

96ウェルケモタシスプレート1枚あたり1000～5000個の細胞しか使用しません。希少で高価な細胞集団や初代細胞集団の低セル使用に最適です。

図 4. ミクログリアの走化性・遊走性を評価。 Incucyte ClearView Plateに入れたiPSC由来のミクログリア（CDI）の画像。孔を青色で囲んでいます（左）。ミクログリアは、時間依存的および濃度依存的に補体成分5a（C5a）へ移動することを示しています。

単球からミクログリアへの分化過程における形態変化の追跡

図5. ミクログリアに分化したiPSC由来単球（Axol BioScience）の形態変化を可視化したもの。 ミクログリアの様々な外観に注目です。12日後、赤い矢印はラミファイド型の外観を持つ細胞をハイライトしており、黄色の矢印はより大きな扁平アメーバ状の細胞を示しています。細胞は14日間、2日ごとに分化培地を与え、6時間ごとに20倍の倍率で位相画像を取得しました。